- 相關(guān)推薦
復(fù)乳法制備雪蓮納米粒的研究
【摘要】 目的利用雪蓮注射液中間體為原料，制備雪蓮納米粒，以提高患者對(duì)雪蓮用藥的順應(yīng)性和達(dá)到緩釋作用。方法以復(fù)乳法制備雪蓮納米粒，雪蓮原料藥溶解于乙二醇中作為內(nèi)水相，聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷-丙酮(2∶1)的混和溶劑中作為油相，加入乳化劑形成W/O型初乳后以蒸餾水作為外水相在乳化劑作用下形成W/O/W型復(fù)乳納米溶液。結(jié)果納米粒的平均粒徑在134 nm;Zeta電位為-8.06;包封率為42.83%，載藥量為2.17%;12 h體外釋放39.57%。結(jié)論復(fù)乳法能夠得到性質(zhì)穩(wěn)定和具有緩釋功能的雪蓮納米粒。
【關(guān)鍵詞】 雪蓮; PLGA 納米粒; 復(fù)乳法; 緩釋
Abstract：ObjectiveTo prepare saussurea nanoparticles by using of saussurea injection intermediate so to improve the patients’ compliance and release slowly. MethodsMultiple emulsion method was used to prepare the saussurea nanoparticles. Saussurea injection intermediate dissolved in ethylene glycol as internal water phase, PLGA dissolved into the mixed solution that dichloromethane ∶acetone was 2∶1 as oil phase, adding emulsifier to form W / O type primal emulsion, then add the primal emulsion to the distilled water contain emulsifier to form W/O/W type multiple emulsion. ResultsThe particles mean size of the best prescription of the nanoparticles was 134 nm, the drug loading was 42.83%, and encapsulation ratio was 16.08%. Vitro release rate was 39.57% in 12 hours. ConclusionThe stable and slow-released saussurea nanoparticles can be prepared by multiple emulsion method.
Key words：Saussurea; PLGA nanoparticles; Multiple emulsion method; Slow-release
雪蓮注射液的主要成分包括黃酮、多糖和生物堿類。其中黃酮類成分是雪蓮抗炎止痛的主要成分，能夠促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)激素的合成，不但能顯著提高小鼠免疫功能，對(duì)抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[1]，還具有抗癌、解痙、降壓和平喘作用[2，3]。生物堿能夠收縮血管，改變血管通透性從而起到強(qiáng)心、抗炎抗風(fēng)濕和鎮(zhèn)痛作用。多糖類成分則具有消除自由基、抗疲勞作用，并且能夠興奮子宮平滑肌，治療婦女小腹冷痛[1]。納米中藥作為中藥現(xiàn)代化的重要手段之一，為藥物在機(jī)體內(nèi)的吸收和發(fā)揮作用提供了更為廣泛的選擇，賦予傳統(tǒng)中藥以新的功能，如緩釋、增強(qiáng)靶向性、豐富給藥途徑、提高生物利用度、降低毒副作用等[4]。本文利用包含雪蓮有效成分的雪蓮注射液中間體為原料藥，將傳統(tǒng)的注射液改為復(fù)乳型納米溶液，為制成順應(yīng)性更高的劑型提供技術(shù)支持。
1 材料與儀器
1.1 試劑雪蓮原料藥(雪蓮注射液的中間體，新疆民族藥中藥研究所提供);聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA，50/50，M=15000，山東岱罡生物公司);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所);甲醇(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)為色譜純;氫氧化鈉、磷酸二氫鉀吐溫-80、司班-80(上海醫(yī)藥集團(tuán)上�；瘜W(xué)試劑公司)、二氯甲烷、丙酮、乙二醇、甲醇、乙腈等(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)均為分析純。
1.2 儀器BS124S 電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司; SPD-20A 島津高效液相色譜儀：日本島津公司;布魯克海文激光粒徑儀Zeta PLUS-90：美國(guó)布魯克海文儀器公司;GG-17旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海大研儀器有限公司;TGL-16C高速臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠;電鏡：JEM-2010/INCA OXFORD, 日本。
2 方法[5，6]
2.1 納米粒的制備稱取10 mg雪蓮注射液中間體超聲溶解于1 ml乙二醇中，為內(nèi)水相，稱取33.9 mg PLGA加入燒杯中，加入2∶1的二氯甲烷-丙酮至重量為2.56 g，作為油相，加入司班-80 0.25 g，吐溫-80 0. 50 g，在油相中加入攪拌子，在磁力攪拌器上高速攪拌使油相和乳化劑混合均勻，然后用注射器抽取0.3 ml內(nèi)水相緩緩滴加到油相中,3 000 r/min攪拌形成具有藍(lán)色乳光的W/O型初乳。稱取吐溫-80 0.65 g，加入80 ml蒸餾水中作為外水相，在乳化劑作用下將制得的W/O型初乳滴入其中，900 r/min攪拌制得W/O/W復(fù)乳型納米溶液。最后將制得的納米溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸，去除有機(jī)溶劑。
2.2 粒徑測(cè)量取適量雪蓮納米粒膠體分散體系加去離子水稀釋10倍,用激光散射粒度測(cè)定儀測(cè)定其粒徑平均大小。
2.3 Zeta電位將稀釋10倍的納米溶液靜置1 h,用Zeta電位儀測(cè)定其電位，平行測(cè)定6次。
2.4 透射電鏡實(shí)驗(yàn)(TEM)在經(jīng)透射電鏡掃描以前，對(duì)納米溶液應(yīng)進(jìn)行處理：配制2%的磷鎢酸溶液，將納米溶液滴加在銅網(wǎng)上后，待表面烘干，滴加1～2滴2%的磷鎢酸溶液進(jìn)行染色，再在燈下將所制樣品徹底烘干后進(jìn)樣觀察。
2.5 載藥量、包封率的測(cè)定采用HPLC法對(duì)納米粒的載藥量和包封率進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)雪蓮的有效成分采用蘆丁(Rutin)作為標(biāo)準(zhǔn)品，以黃酮類成分的含量反映藥物的含量。使用迪馬C18反相色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)在356 nm波長(zhǎng)下以甲醇：0.1%磷酸水溶液5∶5為流動(dòng)相[7];流速1ml/min。檢測(cè)得蘆丁的保留時(shí)間是4.86 min。取所制得的納米溶液1 ml，用0.1μm微孔濾膜濾去納米粒，濾液測(cè)定得游離藥物的量WF，1 ml納米溶液超聲破壞30 min,加4倍甲醇沉淀PLGA，10 000 r/min離心30 min, 進(jìn)樣測(cè)定所得濃度×5為藥物總量WT。每毫升納米溶液凍干后質(zhì)量為WN，每毫升納米溶液中藥物的投入量為WD。按下式計(jì)算包封率、載藥量。包封率(%)=(WT-WF)/ WT載藥量(%)= (WT-WF) /WN
2.6 體外釋放實(shí)驗(yàn)[8，9]本實(shí)驗(yàn)根據(jù)2005版《中國(guó)藥典》配制磷酸鹽緩沖液PBS (pH=7.4)作為釋放介質(zhì)，考察雪蓮納米粒的體外釋藥曲線。剪取10cm長(zhǎng)的透析袋，用沸水煮5～10 min,再用蒸餾水沖洗干凈。取納米溶液6 ml, 加12 ml釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)入透析袋中，檢查確保不漏液。將透析袋置于盛有70 ml釋放介質(zhì)(PBS)燒杯中，加攪拌子 37℃恒溫50 r/min恒速磁力攪拌。在0，2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 ，24 h后從透析袋外取溶液1.5 ml，同時(shí)補(bǔ)充相同體積的釋放介質(zhì)。將取出的樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè)，計(jì)算其中藥物含量。配制相同藥物濃度的雪蓮原料藥的PBS溶液，按同樣方法測(cè)量釋放速率。
3 結(jié)果
3.1 納米粒的制備和形態(tài)考察本實(shí)驗(yàn)采用復(fù)乳法制備雪蓮納米粒，主要以粒徑及包封率為表征參數(shù)，考察乳化劑和油相的用量對(duì)納米粒形成的影響。
3.1.1 納米粒的處方優(yōu)化處方優(yōu)化以能形成穩(wěn)定、大小適度的納米粒和較高的藥物包封率為前提，主要從乳化劑的種類和用量、水油相之比等納米粒形成的關(guān)鍵步驟來(lái)篩選優(yōu)化處方。見(jiàn)表1～3。表1 內(nèi)水相乳化劑的用量對(duì)納米粒成型的影響 表2 二氯甲烷-丙酮的體積比對(duì)鈉米粒成型及包封率的影響· 表3 油相(二氯甲烷-丙酮)的量對(duì)納米粒成型的影響。
3.1.2 粒徑測(cè)定粒徑，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1。納米粒平均粒徑為134.6 nm。圖1 處方優(yōu)化后制備成納米粒的粒徑分布
3.1.3 Zeta電位用Zeta電位儀測(cè)定其電位，測(cè)得平均Zeta電位為-8.06。說(shuō)明納米溶液較穩(wěn)定。
3.1.4 透射電鏡實(shí)驗(yàn)(TEM)用透射電鏡觀察到納米粒的形態(tài)。見(jiàn)圖2。圖2 優(yōu)化后處方制備納米粒的電鏡圖 由電鏡照片看出納米粒形態(tài)為類球形,表面較光滑,大小均勻,納米粒之間基本無(wú)黏連。
3.2 載藥量、包封率和藥物利用率包封率(%)=WT-WF/WT=42.83%載藥量(%)=(WT-WF)/WN= 2.17%
3.3 體外釋放實(shí)驗(yàn)原料藥和納米粒的體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示：圖3 雪蓮原料藥和雪蓮納米粒體外釋放曲線由HPLC測(cè)定，計(jì)算納米粒溶液和雪蓮原料藥的體外累積釋放率得知，雪蓮原料藥體外釋放在2 h 達(dá)到82.14%，釋放速度很快。而在相同條件下，納米粒溶液在2 h時(shí)釋放為2.08%，12 h后達(dá)39.57%，釋放速度減緩，說(shuō)明所制得納米粒能達(dá)到較好的緩釋效果。
4 討論
根據(jù)PLGA和雪蓮原料藥的理化特性，選用復(fù)乳法制備聚合物納米粒是行之有效的方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)改變油相成分及用量、乳化劑用量從而制備得到理化性質(zhì)較好的納米粒溶液。
通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)的考察，雪蓮納米粒與雪蓮原料藥相比能達(dá)到緩釋作用，但體內(nèi)是否能提高生物利用度，還有待于進(jìn)一步考察。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 趙 莉,王曉玲. 新疆雪蓮的化學(xué)成分藥理作用及其臨床應(yīng)用[J]. 西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2003,29(4):424.
[2] 陳玉珍,李鳳蘭. 藥用資源植物雪蓮化學(xué)成分及藥理作用[J]. 中國(guó)野生植物資源，2005,24(3):1.
[3] 李君山,蔡少青. 雪蓮花類藥材的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志，1998,33(8):449.
[4] 劉麗芳，張陽(yáng)德. 納米中藥研究與中藥現(xiàn)代化[J]. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2009，19(8):1186.
[5] 董 鑫. PLGA 載多柔比星磁性納米微球的制備與表征 [J]. 常熟理工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,22(10): 43.
[6] Bergson F.OLIVEIRA, Ana E.R.FERREIRA, Silvia L.FIALHO & Armando SILVA-CUNHA.(2009) Lat.Am.J.Pharm.28:409.
[7] 張 慧，趙 翔. HPLC法測(cè)定復(fù)方雪蓮膠囊中蘆丁的含量[J]. 光明中醫(yī)，2009,24(2)：214.
[8] 黃 義，李新中,雷 鵬，等. 黃芩苷固體脂質(zhì)納米粒體外釋放研究[J]. 中國(guó)藥房，2009,20(9)：646.
[9] 符旭東,高永良.緩釋微球的釋放度試驗(yàn)及體內(nèi)外相關(guān)性研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)新藥雜志，2003,12(8):608.
【復(fù)乳法制備雪蓮納米粒的研究】相關(guān)文章：
PVDF疏水膜的制備研究03-02
硅薄膜的制備及光學(xué)性能研究03-01
高溫炭化法制備竹炭的研究03-11
紫杉醇納米粒的研究進(jìn)展11-17
高溫炭化法制備竹炭的研究-吸附11-16
日本乳業(yè)補(bǔ)貼對(duì)中國(guó)的借鑒研究03-27
納米復(fù)相陶瓷研究03-19
維生素C膠囊的制備工藝研究12-05