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微生物檢驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答
微生物包括：細(xì)菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、顯微藻類等在內(nèi)的一大類生物群體，它個(gè)體微小，與人類關(guān)系密切。以下是小編為大家收集的微生物檢驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答，僅供參考，歡迎大家閱讀。
一、方法驗(yàn)證
1.做過(guò)驗(yàn)證的樣品微生物檢驗(yàn)方法是否都需要按照新的方法進(jìn)行重新驗(yàn)證？
答：對(duì)于微生物限度檢查的產(chǎn)品而言，由于培養(yǎng)時(shí)間調(diào)整，應(yīng)重新進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)于無(wú)菌檢查的產(chǎn)品而言，如果方法未作實(shí)質(zhì)性調(diào)整，可以不必重新驗(yàn)證。個(gè)別產(chǎn)品在各論中收載了新的無(wú)菌檢查方法，對(duì)這些品種，應(yīng)對(duì)收載方法的適用性進(jìn)行驗(yàn)證。
2.以前做過(guò)無(wú)菌驗(yàn)證的品種是否需要重新按照新的標(biāo)準(zhǔn)再驗(yàn)證？
答：參見(jiàn)問(wèn)題1。
3.“新增抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜”比如注射用克林霉素磷酸酯屬于抗生素，是否需要重新選取濾膜再驗(yàn)證？
答：目前采用的方法如果經(jīng)驗(yàn)證表明可行，則可以繼續(xù)使用該方法。
4.微生物方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間是否跟樣品日常檢驗(yàn)所培養(yǎng)時(shí)間一致？
答：應(yīng)該一致。
5.微生物限度驗(yàn)證時(shí)，如果一個(gè)方法只有金葡回收率達(dá)不到要求，該方法時(shí)是否可以用來(lái)做細(xì)菌霉菌的檢測(cè)方法？
答：按藥典的規(guī)定，一個(gè)計(jì)數(shù)方法通過(guò)驗(yàn)證，是指所有試驗(yàn)菌的回收率均達(dá)到要求。如果采用各種方法以及方法的組合仍無(wú)法使金葡回收率達(dá)標(biāo)，則可以采用使金葡回收率最高的方法作為計(jì)數(shù)方法。
6.薄膜過(guò)濾的沖洗量不能超過(guò)1000ml，我公司的喹諾酮類產(chǎn)品原來(lái)的方法是每張膜沖洗量為1500和2000ml，請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有合適的方法將沖洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合規(guī)定？
答：有幾種辦法可以降低沖洗劑的用量：
1)降低接觸濾膜的供試品的濃度;
2)改進(jìn)沖洗的方式，如少量多次地沖洗、降低蠕動(dòng)泵的轉(zhuǎn)速等;
3)添加中和劑，如高價(jià)金屬離子。
7.微生物限度檢查法規(guī)定，技術(shù)方法驗(yàn)證時(shí)，采用上述方法若還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收率達(dá)不到要求，那么選擇回收率最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品檢驗(yàn)。請(qǐng)問(wèn)，上述方法是指僅通過(guò)一種方法還是一定要通過(guò)幾種方法聯(lián)用的？
答：應(yīng)該要把可能采用的所有方法包括方法聯(lián)用都進(jìn)行驗(yàn)證。
8.供試品不溶于稀釋劑，同時(shí)又有抑菌性，限度檢查時(shí)應(yīng)如何消除抑菌性？
答：采用低速離心的方式，盡可能把供試品去除干凈，取離心后的上層液，進(jìn)行薄膜過(guò)濾。
9.不溶于水的固體產(chǎn)品，加表面活性劑后，如何操作才能在方法驗(yàn)證中得到較好的回收率？
答：同問(wèn)題8。
10.有些品種2010年藥典與2005年比較檢驗(yàn)方法變了，是否需要驗(yàn)證或確認(rèn)？
答：同問(wèn)題1。
二、菌種管理
1.濃菌液的有效期該如何確定？
答：藥典沒(méi)有規(guī)定。可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定有效期。例如，在不同的時(shí)間點(diǎn)測(cè)定濃菌液的濃度，從而判斷其有效期。
2.藥典要求菌液在制備后2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在2-8℃的菌懸液可在在24小時(shí)內(nèi)使用，那我們?cè)谧鲵?yàn)證或陽(yáng)性對(duì)照是要加一定量的菌就沒(méi)有時(shí)間進(jìn)行平板計(jì)數(shù)了，該如何確保所加菌量準(zhǔn)確？
答：藥典對(duì)稀釋菌液的使用期限作出規(guī)定，并不會(huì)影響操作過(guò)程中稀釋菌液的加入。即便不規(guī)定，也無(wú)法在準(zhǔn)確知道菌液濃度的情況下加入試驗(yàn)菌。菌液稀釋的實(shí)驗(yàn)操作和加入菌液的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)該是在同一次實(shí)驗(yàn)中完成的，要使加入的菌量符合藥典的規(guī)定，可以從濃菌液的制備方法、菌液稀釋的方法等方面進(jìn)行規(guī)范，也可以引入濁度比較的方法。
3.菌懸液能否在倒平板之前確定菌含量？
答：活菌含量是無(wú)法確定的�？偩靠梢酝ㄟ^(guò)比濁的方式確定。
4.具體從哪些方面進(jìn)行菌種菌株的特性和純度確認(rèn)？如何操作？
答：基層的微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌種純度確認(rèn)可以考慮以下一些方面：1)形態(tài)學(xué)鑒定，包括菌落形態(tài)和染色形態(tài);2)生化鑒定，可以考慮使用API鑒定系統(tǒng)。
5.黑曲霉凍干菌種如何轉(zhuǎn)種，傳代？
答：與其他菌種一樣，所不同的是使用的培養(yǎng)基應(yīng)改為改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。
6.干粉狀的是否可做第0代使用？
答：只要是菌種保藏機(jī)構(gòu)提供的凍干保藏的菌種，可以確定為第0代。
7.菌種每次傳代都要做純度、特性等的確認(rèn)嗎？
答：從外部購(gòu)入的菌種，在進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)室的菌種保藏體系時(shí)，需要進(jìn)行純度和特性的確認(rèn)。以后的每次傳代，可以通過(guò)顯色培養(yǎng)基做簡(jiǎn)單的確認(rèn)即可。
8.如采用低溫保存菌種，需購(gòu)買哪些設(shè)備？能夠到省所進(jìn)行實(shí)際操作培訓(xùn)？
答：低溫冰箱，應(yīng)能夠提供-70℃的低溫�？梢缘绞∷鶃�(lái)培訓(xùn)。
9.做方法驗(yàn)證時(shí)，工作用菌種能否同時(shí)操作，如何防止交叉污染？
答：可以同時(shí)操作。避免交叉污染的關(guān)鍵是無(wú)菌操作技術(shù)。
10.是否等菌懸液的含菌數(shù)出結(jié)果后再做適用性等檢查？
答：沒(méi)有必要�？蓞⒁�(jiàn)問(wèn)題2。
11.菌液制備中菌液是否都要驗(yàn)證儲(chǔ)存期？
答：稀釋菌液可參考藥典規(guī)定。如要保存濃菌液，則需要驗(yàn)證有效期。
12.菌種CMCC是否可以用ATCC替代，從省所或中檢所購(gòu)買的菌種是否每次都可以出具規(guī)范的COA？
答：中國(guó)藥典使用CMCC的菌種，并沒(méi)有規(guī)定可以使用其他等效的菌種。省所提供的菌種嚴(yán)格講屬于標(biāo)準(zhǔn)貯備菌種，無(wú)法提供ATCC這樣的COA。CMCC至今也無(wú)法提供這類證明。
13.銅綠假單胞如何保藏？答：可以使用低溫冷凍保存的方法。
14.工作用菌液是否屬于亞培養(yǎng)或傳代一次？
答：工作用菌液應(yīng)屬于一次傳代。
三、微生物限度
1.包裝材料的大腸埃希菌檢查？
答：根據(jù)包裝材料的不同，大腸埃希菌的檢查方法大致有兩種，一種是將浸提液合并后，取一部分，接種膽鹽乳糖培養(yǎng)基進(jìn)行檢查;另一種是將浸提液合并后，薄膜過(guò)濾，然后按規(guī)定的方法檢驗(yàn)。
2.抗真菌藥品的微生物限度檢查法
答：這類產(chǎn)品的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法需要進(jìn)行調(diào)整，可以根據(jù)產(chǎn)品劑型的不同，選擇薄膜過(guò)濾法或培養(yǎng)基稀釋法等方法。
3.為什么在日常樣品檢測(cè)中還需要做陽(yáng)性對(duì)照(國(guó)外不需要)？
答：為了確保每一次檢測(cè)對(duì)可能存在的微生物都是有效的。
4.對(duì)于同一個(gè)品種，藥典為什么不規(guī)定統(tǒng)一的檢測(cè)方法？
答：本版藥典進(jìn)行過(guò)這樣的嘗試，也有某些品種已經(jīng)收載了統(tǒng)一的檢測(cè)方法，如注射用頭孢類抗生素的無(wú)菌檢查。之所以沒(méi)有大量收載，主要是由于檢測(cè)方法還沒(méi)有經(jīng)過(guò)必要的復(fù)核。將微生物檢驗(yàn)的統(tǒng)一方法收載在品種的各論項(xiàng)下，始終是努力的方向。
5.梭菌檢查中需置厭氧條件下培養(yǎng)48小時(shí)，是否指在厭氧培養(yǎng)箱中？
答：需要在厭氧培養(yǎng)裝置中進(jìn)行培養(yǎng)，未必一定是厭氧培養(yǎng)箱。
6.控制菌檢查方法驗(yàn)證時(shí)，采用多種方法均未檢出控制菌，如何處理？
答：在確保所使用的各種方法都沒(méi)有錯(cuò)誤的情況下，如果仍無(wú)法使試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，則應(yīng)該采用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行檢查。理由是該方法能夠最大程度地去除產(chǎn)品的抑菌作用。
7.常規(guī)的監(jiān)督抽樣檢品(包括原料)在進(jìn)行微生物限度檢查時(shí)，是否一定要進(jìn)行活螨檢查并在原始記錄與報(bào)告書(shū)中體現(xiàn)？
答：需要進(jìn)行檢查�？梢栽谠加涗浿畜w現(xiàn)，報(bào)告書(shū)上可以不出現(xiàn)，除非當(dāng)發(fā)現(xiàn)有活螨檢出。
8.藥包材微生物限度檢查規(guī)定了合格質(zhì)量水平，通常產(chǎn)量下取樣8個(gè)，要求8個(gè)瓶子均符合規(guī)定，如何進(jìn)行？
答：每個(gè)瓶子分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
9.大腸埃希菌具體操作規(guī)程？
答：參見(jiàn)中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。
10.動(dòng)物組織及動(dòng)物類原藥材的提取物入藥，是否需要檢沙門菌？
答：需要進(jìn)行沙門菌檢查。
11.關(guān)于中國(guó)藥典菌落計(jì)數(shù)結(jié)果的判斷還存在疑義，望能舉例說(shuō)明。
答：不清楚所指的存在疑義是指哪方面。2010年版對(duì)結(jié)果報(bào)告進(jìn)行了較大篇幅的修訂，目前的規(guī)定應(yīng)該比05版更為清晰、明確。
12.需做沙門菌檢驗(yàn)樣品量的確定？
答：10g(ml)用于樣品計(jì)數(shù)檢驗(yàn)和其他控制菌檢查，10g(ml)用于沙門菌檢查，10g(ml)用于沙門菌檢查的陽(yáng)性對(duì)照。需要進(jìn)行沙門菌檢查的樣品，檢驗(yàn)用量應(yīng)為30g(ml)。
13.日常的實(shí)驗(yàn)室裝備能否達(dá)到梭菌無(wú)氧的培養(yǎng)要求？
答：完全可以�？梢圆捎脜捬跖囵B(yǎng)盒(罐)。
14.如果一個(gè)產(chǎn)品有兩個(gè)規(guī)格，是否可以取其中之一做陽(yáng)性對(duì)照？
答：每個(gè)規(guī)格均需進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照。
15.細(xì)菌數(shù)為100g/g的，樣品稀釋級(jí)只做1:10,1:100的倍數(shù)就可以了嗎？
答：可以。
16.培養(yǎng)時(shí)間3天，5天，可理解為72小時(shí)，120小時(shí)嗎？
答：可以。這樣更為嚴(yán)謹(jǐn)。
17.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范“已做驗(yàn)證試驗(yàn)的供試品，在檢查時(shí)刻不必再做陽(yáng)性對(duì)照”如何理解？
答：該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范中在無(wú)菌檢查法中規(guī)定“供試品無(wú)菌檢查應(yīng)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)”，表明不論是否進(jìn)行了方法驗(yàn)證，在產(chǎn)品的每一次檢驗(yàn)過(guò)程中，還必須進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照。在控制菌檢查的大腸埃希菌項(xiàng)下，指出“已做驗(yàn)證試驗(yàn)的供試品，在該供試品檢查時(shí)不必再作陽(yáng)性對(duì)照”。該規(guī)定僅適用方法驗(yàn)證與供試品檢查同時(shí)開(kāi)展的情況。2005年版藥典和2010年版藥典在控制菌檢查中均對(duì)陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)有明確規(guī)定，“進(jìn)行供試品控制菌檢查時(shí)，應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)�！碑a(chǎn)品檢驗(yàn)中應(yīng)以藥典規(guī)定為準(zhǔn)。
18.無(wú)菌檢查和微生物限度檢查中，產(chǎn)品中規(guī)定的溶解液是否可以換成其他的溶液？
答：可以。
19.制劑通則中，沒(méi)有微生物檢查項(xiàng)目的，是否可不進(jìn)行微生物項(xiàng)目檢測(cè)？
答：可以。主要是二部制劑通則中口服片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑。
20.在細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)中，適用性檢查細(xì)菌是培養(yǎng)48小時(shí)，霉菌和酵母菌是培養(yǎng)72小時(shí)，供試品檢查中細(xì)菌是培養(yǎng)3天，霉菌和酵母菌是培養(yǎng)5天，那方法驗(yàn)證中應(yīng)參照哪個(gè)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)。
答：應(yīng)按照供試品檢驗(yàn)時(shí)的條件，即細(xì)菌3天，霉菌和酵母菌5天。
21.測(cè)定純化水微生物限度時(shí)，每張濾膜過(guò)濾量是多少合適？需要先稀釋嗎？過(guò)濾完后需不需要沖洗？假如我取10ml純化水通過(guò)雙杯體封閉式薄膜過(guò)濾器過(guò)濾，每張濾膜上的計(jì)數(shù)是以5ml為單位還是10ml為單位？
答：過(guò)濾量應(yīng)以培養(yǎng)后出現(xiàn)的微生物數(shù)不超過(guò)100cfu/膜為標(biāo)準(zhǔn)。一般可不稀釋。不需要沖洗。每張濾膜的過(guò)濾量為5ml。
22.2010藥典中關(guān)于純化水的微生物限度是：細(xì)菌、霉菌及酵母菌總數(shù)每1ml不得過(guò)100個(gè)。這句話的意思是細(xì)菌總數(shù)每1ml不得過(guò)100個(gè)，霉菌及酵母菌總數(shù)不得過(guò)100個(gè)，還是細(xì)菌+霉菌+酵母菌總數(shù)每1ml不得過(guò)100個(gè)。如果是三者總數(shù)的話，那細(xì)菌總數(shù)限度是多少？霉菌及酵母菌總數(shù)限度又是多少？
答：是總數(shù)不得過(guò)100個(gè)。沒(méi)有必要考慮各自的限度值。
拓展閱讀：微生物檢驗(yàn)的名詞解釋大全
微生物：是一群個(gè)體微小 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單 肉眼不能看見(jiàn)的微小生物的總稱
種：親緣關(guān)系較近的微生物群體 在進(jìn)化發(fā)育階段上有一定的共同形態(tài)和生理特征
微生物學(xué)：生物學(xué)的一個(gè)分支 是研究微生物在一定條件下的形態(tài)結(jié)構(gòu) 生理生化遺傳變異特性及微生物的進(jìn)化 分類 生態(tài)等生命活動(dòng)規(guī)律以及微生物之間 與人類 動(dòng)植物 自然界互相關(guān)系的一門科學(xué)
抗生素：是由某些微生物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的 能抑制或殺滅某些其他微生物和腫瘤細(xì)胞的微量生物活性物質(zhì)
細(xì)菌素：是某些細(xì)菌菌株產(chǎn)生的一類具有抗菌作用的蛋白質(zhì)
條件致病菌：正常菌群在宿主體內(nèi)具有相對(duì)穩(wěn)定性 一般不致病
消毒：指殺死物體上的病原微生物但不一定能殺死細(xì)菌芽孢的方法
滅菌：指殺滅物體上所有的微生物的方法
防腐：指防止或抑制微生物生長(zhǎng)繁殖的方法
無(wú)菌：指沒(méi)有貨的微生物的存在
質(zhì)粒：是細(xì)菌染色體外的遺傳物質(zhì) 也是環(huán)狀閉合的雙聯(lián)DNA分子 比染色體小 存在于細(xì)胞質(zhì)中 可自主復(fù)制
突變：是指細(xì)菌遺傳物質(zhì)的機(jī)構(gòu)發(fā)生突然而穩(wěn)定的改變 所致的變異現(xiàn)象可遺傳給后代 基因轉(zhuǎn)移：外源性物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)的過(guò)程
基因重組：供體菌的基因進(jìn)入受體菌細(xì)胞 并在其中自行復(fù)制與表達(dá) 或矛受體菌DNA整合在一起的過(guò)程
病毒：是一類個(gè)體微小 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單 只含一種核酸 只能在活的易感細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物
復(fù)制周期：病毒的增殖被人為分成吸附 穿入 脫殼 生物合成 裝配 成熟與釋放七個(gè)步驟的完整過(guò)程
缺陷病毒：是指因病毒基因組不完整或因基因某一點(diǎn)改變而不能進(jìn)行正常增殖的病毒 頓挫感染：病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞 若細(xì)胞缺乏病毒復(fù)制所需的酶 能量和必要成分等 則病毒無(wú)法合成自身成分不能夠裝配和釋放子代病毒的現(xiàn)象
干擾現(xiàn)象：兩種病毒感染同一種細(xì)胞時(shí) 可發(fā)生一種病毒抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象 人工自動(dòng)免疫：是將疫苗等免疫原接種于人體 刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答 使機(jī)體獲得特異性免疫力
人工被動(dòng)免疫：是指注射含某種病毒特異性中和抗體的免疫血清等一系列細(xì)胞因子 是機(jī)體立即獲得特異性免疫
干擾素：是由病毒或干擾素誘生劑作用于中性粒細(xì)胞 成纖維細(xì)胞或免疫細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白
致病性：一定種類的病原微生物 在一定的條件下能在特殊的宿主體內(nèi)引起特定疾病的能力 半數(shù)致死量：在規(guī)定時(shí)間內(nèi) 通過(guò)一定途徑 能使一定體重或年齡的某種動(dòng)物半數(shù)死亡或感染需要的最小病原體數(shù)量或毒素量
急性感染：發(fā)作突然 病程較短 一般是數(shù)天或數(shù)周
局部感染：病原體侵入機(jī)體后 局限就在一定部位生長(zhǎng)繁殖引起病變的一種感染類型 毒血癥：致病菌侵入宿主體后 只在機(jī)體局部生長(zhǎng)繁殖 病菌不進(jìn)入血液循環(huán) 但其產(chǎn)生的外毒素入血 引起特殊的毒性癥狀
敗血癥：致病菌侵入血流后 在其中大量繁殖并產(chǎn)生毒性產(chǎn)物 引起全身性毒性癥狀
內(nèi)毒素血癥：革蘭陰性菌侵入血流 并在其中大量繁殖 崩解后釋放出大量毒素 也可有病灶內(nèi)大量革蘭陰性菌死亡 釋放的內(nèi)毒素入血所致
培養(yǎng)基：是指人工方法配制的適合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)
CFU：菌落形成單位
細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）：是指某些病毒感染組織細(xì)胞后 正常生長(zhǎng)的梭形細(xì)胞變圓 變性 壞死 溶解及從培養(yǎng)瓶壁脫落 細(xì)胞堆積形成葡萄狀
包涵體：某些病毒感染細(xì)胞后 可在細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中形成包涵體
醫(yī)院感染：是指住院患者在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染 包括在住院期間發(fā)生的感染和在醫(yī)院內(nèi)獲得出院后發(fā)生的感染 但不包括在入院前已開(kāi)始或住院時(shí)已存在的感染
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