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膀胱上皮細胞特異性啟動子UroplakinII的克隆及功能研究
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 朱宏建 張智清 曾祥福 魏守順 徐春曉 黃國錦 郭應祿 |
| 第1作者單位： | 武警總醫(yī)院 |
| 論文摘要： | 探討應用UroplakinII (UPII) 啟動子靶向性基因治療膀胱癌的可行性以及UPII啟動子的調控機理。采用半定量RT-PCR方法，檢測了人類膀胱移行細胞癌細胞株（BIU-87）和腎癌細胞株（GRC-1）、臍靜脈血管內皮細胞株（EC）、肺癌細胞株（A549）、皮膚成纖維細胞株（Hs27）中UPII基因mRNA的表達情況。從正常人外周血中提取基因組DNA，以此DNA為模板，根據(jù)人基因組草圖序列設計引物，應用多聚酶聯(lián)反應技術（PCR）克隆人UPII結構基因第1外顯子5’端上游1段序列（hUPII），同時構建以綠色熒光蛋白（GFP）和熒光素激酶（Luc）為報告基因的重組質粒，并構建含不同長度hUPII突變體的重組質粒，應用脂質體轉染技術，將重組質粒轉染入BIU-87和GRC-1、EC、A549、Hs27，利用共聚焦顯微鏡、流式細胞儀和微板檢測儀觀察細胞表達綠色熒光蛋白和熒光素激酶的情況。結果: UPII基因的mRNA在BIU-87中有較高表達，而在其它組織細胞中表達極低。PCR克隆得到UPII結構基因第1外顯子5’端上游1段2542bp的序列。重組質粒轉染后，BIU-87表達綠色熒光蛋白較多，10-20/HP，亮度較強，流式細胞儀測定表達量為10.1%。而GRC-1、EC細胞表達極少，0-5/HP，亮度暗，流式細胞儀測定表達量為0和1.8％。熒光素激酶在BIU-87中的表達量是其它組織細胞的2.2倍以上，存在顯著性差異（P<0.01）。hUPII-1、hUPII-2、hUPII-5在膀胱癌細胞中表達熒光素激酶的量明顯低于hUPII，但在其它組織細胞中的表達量僅略有減少，hUPII-3和hUPII-4在各種組織細胞中均不表達熒光素激酶。結論:本研究克隆的序列具有類似人UPII啟動子的功能，UPII啟動子上游973bp大小的序列決定了該啟動子的組織特異性，下游325bp序列為該啟動子的核心啟動序列。 |
| 關鍵詞： | UroplakinII；啟動子；膀胱癌 遠程下載 論文(免費PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2006年10月29日 |
| 同行評議： | （暫時沒有）
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| 綜合評價： | （暫時沒有） |
| 修改稿： |
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