膀胱癌細胞凋亡與MDM2和P53基因表達的意義

作者：楊承綱，張麗娟，李梅，陳蕓
【關鍵詞】 膀胱腫瘤；P53基因；MDM2基因；免疫組織化學；細胞凋亡
［摘 要］ 目的：研究膀胱癌細胞凋亡、MDM2、P53基因表達的意義。方法：采用免疫組織化學方法及TUNEL法檢測11例“正常膀胱黏膜”和83例膀胱移行細胞癌中MDM2、P53基因的表達及細胞凋亡指數(shù)。結果：P53陽性率為50.6%,MDM2陽性率為59.03%，AI=1.433 5±0.386 3。MDM2陽性表達與病理分級及臨床分期呈負相關(R=-0.263,P=0.016及R=-0.388,P=0.001);P53陽性表達與病理分級及臨床分期呈正相關(R=0.492,P=0.001；R=0.341，P＜0.01);MDM2、P53三種蛋白間表達無相關性；AI與MDM2呈負相關（R=-0.226,P=0.042）；AI與病理分級及臨床分期呈正相關(R=0.642,P=0.000；R=0.455，P=0.000)；AI與P53無相關性。AI、P53、MDM2的表達與5 a生存率有關。結論：聯(lián)合運用臨床分期及病理分級并檢測P53、MDM2可用于判斷膀胱移行細胞癌的預后。
　�。坳P鍵詞］ 膀胱腫瘤；P53基因；MDM2基因；免疫組織化學；細胞凋亡
　　Clinical Significance of Expression of MDM2 P53 Protein and Apoptosis in Bladdercancer
　　Abstract：Objective To investigate the expression of MDM2 Pgp protein and apoptosis and its significance in bladder cancers.Methods Apoptosis Index(AI) was assessed with TUNEL technique,and immunohistochemical stainings of MDM2 and Pgp were performed in 83 cases of the carcinomas and 11 “normal” bladder mncosa.Results The positive expression rate of P53 gene was 50.6% and MDM2 was 59.03%,and AI=1.433 5±0.386 3.The level of MDM2 was negative correlated with the tumor pathological grade and clinical stage(R=-0.263,P=0.016及R=-0.388,P=0.001);The level of P53 was positive correlated with the tumor pathological grade(R=0.492,P=0.001);No correlated was found between MDM2 and P53 gene;The level of AI was negative correlated with MDM2(R=-0.226,P=0.042);The level of AI was positive correlated with the tumor pathological grade and clinical stage (R=0.642,P=0.000；R=0.455，P=0.000);The level of AI was no correlated with P53.AI and the expression of P53 and MDM2 were related to 5year survival rate.Conclusion By exerting the tumor pathological grade and clinical stage and detecting P53 MDM2 genes expressions,the prognosis of bladder cancer can be decided.論文網在線
　　Key words：Bladder neoplasm；P53 gene；MDM2 gene；Immunohistochemistry；Apoptosis
MDM2基因是一原癌基因，與P53構成降解反式激活循環(huán)通路，參與細胞生長抑制、凋亡、細胞周期調控等過程。細胞凋亡是由基因調控的細胞主動死亡過程，同腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及臨床治療有密切的關系。本研究采用免疫組化方法觀測MDM2、P53基因在人膀胱癌細胞中的表達及用TUNEL法檢測細胞凋亡，探討它們在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及其對膀胱癌生物學行為和預后的影響。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料 收集本院病理科1996年至2004年間膀胱移行細胞癌83例及11例正常膀胱黏膜組織，83例膀胱移行細胞癌中男性66例，女性17例，年齡35歲~82歲，平均年齡58.5歲。病理檢查前均未接受過放療和化療，術后均進行化療藥物膀胱灌注。按1999年WHO病理組織學分級標準，Ⅰ級29例，Ⅱ級31例，Ⅲ級23例；按UICC臨床分期，TisT1期61例，T2T4期22例。所有標本均經10%甲醛固定、石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。術后隨訪16個月~5 a，平均38個月，失訪5例，腫瘤復發(fā)或轉移56例，死亡2例，無復發(fā)或轉移20例。
　　1.2 方法
　　1.2.1 陰性、陽性檢測 MDM2、P53單抗均購自福州邁新公司。采用SP法進性免疫組化染色，嚴格按照試劑盒說明書操作。用已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。結果判定：MDM2、P53以細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，陽性細胞＞10%為陽性結果，反之為陰性結果（見圖1，圖2）。
　　圖1 P53陽性表達于腫瘤細胞核，呈棕黃色顆粒(SP×400)（略）
　　圖2 MDM2陽性表達于細胞核呈棕黃色顆粒（SP×400）（略）
　　1.2.2 凋亡個數(shù)檢測 細胞凋亡檢測（末端脫氧核苷酸轉移酶介導的xdUTP切口末端標記，terminal deoxynucleotide transferase mediated dUTPnick end labeling method,TUNEI法）試劑盒，DAB顯色試劑盒購于福州邁新公司。步驟：切片脫蠟水化，3%H2O2清除內源性過氧化酶10 min，蒸餾水洗滌2 min共洗3次；加TBS1∶100蛋白酶K，37 ℃消化10 min，蒸餾水洗滌2 min共洗3次；每片加TDT和DIGdUTP各1 μl，標記緩沖液18 μl，4 ℃冰箱過夜，TBS洗2 min共洗3次；加封閉液50 μl，室溫30 min；封閉液1∶100生物素化地高辛抗體50 μl，37 ℃反應30 min；TBS洗2 min共洗3次；加TBS1∶100稀釋SABC，37 ℃反應30 min；TBS洗5 min共洗4次；DAB顯色，蘇木素襯染，脫水、透明、封片。實驗中以不含TDT的試劑作陰性對照。結果判定：TUNEL法檢測陽性表現(xiàn)為在腫瘤組織中散在分布胞核呈棕黃色顆粒著色的細胞(見圖3)。在400倍光鏡下，隨機選擇10個視野并計數(shù)1 000個腫瘤細胞，記錄凋亡細胞數(shù)。計算細胞凋亡指數(shù)（AI），AI=（凋亡細胞數(shù)/1 000）×100%［1］。
　　圖3 細胞凋亡陽性表現(xiàn)為腫瘤細胞核呈棕黃色顆粒（×400）（略）
　　1.3 統(tǒng)計方法 實驗數(shù)據(jù)經SPSS統(tǒng)計軟件包處理，數(shù)據(jù)以±s表示，采用t檢驗，方差分析，相關分析，cox多因數(shù)分析，以P＜0.05作為差異有顯著意義的檢驗標準。
　　2 結果
　　2.1 檢查 83例膀胱移行細胞癌中,有42例(50.6%) P53陽性,49例(59.03%) MDM2陽性，AI=1.433 5±0.386 3。
　　2.2 病理分級及臨床分期中比較 MDM2Ⅰ級、Ⅱ級與Ⅲ級間表達差異有顯著性(P＜0.05)，Ⅰ級與Ⅱ級間表達差異無顯著性(P＞0.05)；P53Ⅰ級與Ⅱ、Ⅲ級間表達差異有顯著性(P＜0.05)，Ⅱ級、Ⅲ級間表達差異無顯著性(P＞0.05)。MDM2在TaT1與T2T4間表達差異有顯著性(P＜0.05）,P53在兩組中表達差異無顯著性(P＞0.05)。AI在Ⅰ級、Ⅱ級與Ⅲ級間表達及TaT1與T2T4間表達差異有顯著性(P＜0.01)。相關分析發(fā)現(xiàn),MDM2陽性表達與病理分級及臨床分期呈負相關(R=-0.263,P=0.016；R=-0.388,P=0.001);P53陽性表達與病理分級及臨床分期呈正相關(R=0.492,P=0.001；R=0.341，P=0.002);MDM2、P53兩種蛋白間表達無相關性；AI與MDM2呈負相關（R=-0.226,P=0.042）；AI與病理分級及臨床分期呈正相關(R=0.642,P=0.000；R=0.455，P=0.000)；AI與P53無相關性。5 a隨訪AI及P53復發(fā)死亡組顯著高于無復發(fā)組；MDM2復發(fā)死亡組顯著低于無復發(fā)組。詳見表1。
　　2.3 MDM2基因在P53基因陽性表達在膀胱癌中的表達 分析發(fā)現(xiàn)P53陽性表達合并MDM2陽性表達多見于分化好的膀胱癌Ⅰ級、Ⅱ級與Ⅲ級間表達差異有顯著性(P＜0.05詳見表2。
　　表1 Pgp、MDM2、P53表達與病理分級及臨床分期的關系（略）
　　注：*P＜0.05**P＜0.01
　　表2 MDM2基因在P53基因陽性表達膀胱癌中的表達（略）
　　注：*P＜0.05

【膀胱癌細胞凋亡與MDM2和P53基因表達的意義】相關文章：

腺病毒介導凋亡素基因對人膽管癌細胞凋亡的研究03-08

SiRNA穩(wěn)定抑制肝癌細胞hTERT基因的表達03-19

腦缺血與凋亡相關基因的變化03-08

腺性膀胱炎術后膀胱灌注的方法和護理03-16

擬Smac作用下膀胱癌T24 細胞增殖及凋亡的研究03-02

PRAME基因在急性白血病中的表達及臨床意義分析03-08

白血病中MLL重排和HOXa9基因表達12-27

NK-104對人肝癌細胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3活性的影響03-19

研究凋亡素參與正常細胞核蛋白表達差異03-02