西替?zhèn)温閴A緩釋片中西替利嗪在Beagle犬體內(nèi)生物利用度

　　【關(guān)鍵詞】 西替?zhèn)温榫忈屍?/p>

　　摘要:目的 建立高效液相色譜法測定西替?zhèn)温榫忈屍�中西替利嗪在Beagle犬體內(nèi)血藥濃度并進(jìn)行生物利用度評估。方法 以二氯甲烷提取溶劑，異丙嗪為內(nèi)標(biāo);采用C18柱，以乙腈0.02 mol/L的醋酸鈉水溶液高氯酸三乙胺(體積比50∶50∶0.5∶0.1)，用5 mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH 5.2為流動相，檢測波長230 nm。結(jié)果與結(jié)論 本文方法提取率高，回收率好，自制片的相對生物利用度93.0%。

　　關(guān)鍵詞:西替?zhèn)温榫忈屍?高效液相色譜法;藥代動力學(xué);生物利用度

　　Abstract: Objective To establish an HPLC assay for the determination of blood plasma concentration of cetirizine in cetirizinepseudoephedrine sustainedrelease tablets in beagle dogs.Method Cetirizine was extracted by methylene chloride. Promethazine was used as an internal standard and the separation was performed on a reversed phase Diamonsil C18 (5 μm，250 mm×4.6 mm) employing a UVdetection set at 230 nm at ambient temperature. The mobile phase consists of acetonitrile0.02 mol/L acetate water solutionperchloric acidtriethylamine (50∶50∶0.5∶0.1) adjusted to pH 5.2 with 5 mol/L NaOH. Result and Conclusion The assay is linear from 50 to 3200 ng/ml with a detection limit of 15 ng/ml. The relative bioavailability of cetirizine in the tablets was 93.0%.

　　Key words:cetirizinepseudoephedrine sustainedrelease tablets; HPLC; pharmacokinetics; bioavailability

　　鹽酸西替利嗪(cetirizine，CTZ)是第二代抗組胺藥，鹽酸偽麻黃堿為減鼻充血劑，兩者合用藥可以用于治療季節(jié)性，過敏性鼻炎。西替?zhèn)温榫忈屍�通過含5mg鹽酸西替利嗪的速釋層及含120mg鹽酸偽麻黃堿的緩釋層，在保持鹽酸西替利嗪起效迅速的同時減少了鹽酸偽麻黃堿的給藥次數(shù)(1天2次)。西替?zhèn)温榫忈屍�中鹽酸偽麻黃堿的藥動學(xué)研究已有報道[1]，為了評價自制西替?zhèn)尉忈屩宣}酸西替利嗪的藥動學(xué)和相對生物利用度，本文在Beagle犬體內(nèi)進(jìn)行了生物利用度試驗(yàn)。文獻(xiàn)報道鹽酸西替利嗪血藥濃度測定方法有高效薄層色譜法[2]，高效液相梯度洗脫法[3]，本文結(jié)合實(shí)際條件建立了恒流條件下反高效液相色譜法測法測定鹽酸西替利嗪在Beagle犬體內(nèi)血漿藥物濃度。

　　1 儀器與試劑

　　Dionex P680 HPLC Pump(Dionex Corp.)，Dionex UVD170U(Dionex Corp.)，WH―3微型渦漩混合儀(上海滬西分析儀器廠)，BA110S電子天平(德國，Sartorius)，821型袖珍離子式pH計(jì)(中山大學(xué)電子廠)，TDL-60B臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。鹽酸西替利嗪(麗珠制藥廠)，鹽酸異丙嗪針劑(上海禾豐制藥有限公司)，肝素(常州市新華活性材料研究所)，ZyrtecD(輝瑞公司，每片含鹽酸西替利嗪5mg,鹽酸偽麻黃堿120 mg)，西替?zhèn)温榫忈屍?自制)，二氯甲烷(色譜純，依能色譜有限公司)，三乙胺(分析純，汕頭市光華化學(xué)廠)，乙腈(色譜純，依能色譜有限公司)。

　　2 實(shí)驗(yàn)方法

　　1.1 CTZ的體內(nèi)分析方法

　　1.1.1 色譜條件

　　色譜柱：DiamonsilTM C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流動相：乙腈0.02 mol/L的醋酸鈉水溶液高氯酸三乙胺(體積比50∶50∶0.5∶0.1)以5 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH 5.2，檢測波長230 nm，靈敏度0005AUFS，進(jìn)樣體積50 μL。

　　1.2 樣品處理方法

　　吸取0.5 mL血漿于5 mL具塞離心管中，加入50 μL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)液，渦漩振蕩30 s，加入5 mL的二氯甲烷[3,4]，渦漩振蕩1 min，于5 000 r/min離心10 min。棄去上層水相和蛋白，將下層有機(jī)相轉(zhuǎn)移至另一5 mL離心管中，于40 ℃水浴，氮?dú)饬飨聯(lián)]干。殘留物加入100 μL流動相，渦漩振蕩30 s，5 000 r/min離心3 min，精密量取50 μL進(jìn)樣。

　　1.3 系統(tǒng)適用性和專屬性試驗(yàn)

　　將空白血漿和加入藥物及內(nèi)標(biāo)的血漿按“樣品處理方法”處理進(jìn)樣，結(jié)果見圖1，2。在本實(shí)驗(yàn)條件下血漿內(nèi)源性物質(zhì)對測定無干擾，CTZ的保留時間為4.9 min，內(nèi)標(biāo)的保留時間為12 min，分離度好，理論塔板數(shù)均大于3 000，柱效高。

　　1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

　　精密稱取真空干燥至恒重的CTZ 20.0 mg于200 mL容量瓶中，并加水至刻度得濃度為100 μg/mL的CTZ儲備液。依次吸取儲備液0.125、0.25、0.5、1、2、4、8 mL至25 mL容量瓶中，加水至刻度，得CTZ的系列標(biāo)準(zhǔn)液。另將異丙嗪注射劑一支2 mL(含異丙嗪50 mg)轉(zhuǎn)移至500 mL容量瓶中[5]，加水至刻度，將此溶液稀釋10倍得到10 μg/mL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)液。所有儲備液和標(biāo)準(zhǔn)液均存儲于4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

　　取0.5 mL空白血漿于5 mL具塞離心管中，加入50 μL的CTZ上述系列標(biāo)準(zhǔn)液和50 μL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)液，得到含CTZ 50、100、200、400、800、1 600、3 200 ng/mL的血漿樣品，以下操作同“樣品處理方法”，以CTZ面積(Ai)比內(nèi)標(biāo)峰面積(As)的比值對質(zhì)量濃度(ρ)回歸得回歸方程：Ai/As=0.0011ρ+0.0367，r=0.9997，表明線性關(guān)系良好。

　　1.5 回收率試驗(yàn)

　　1.5.1 相對回收率

　　取5 mL具塞離心管，加入空白血漿0.5 mL，精密加入CTZ不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液和內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)液各50 μL，使血漿中CTZ低、中、高3個濃度分別為100 ng/mL，1 600 ng/mL，3 200 ng/mL，按“樣品處理方法”項(xiàng)下操作，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測得量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。表1 CTZ相對回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)

　　1.5.2 絕對回收率 按“樣品處理方法”項(xiàng)下理論值100%提取計(jì)算50 μL中含CTZ的絕對量，取含相同量的CTZ溶液直接進(jìn)樣，其峰面積作為對照峰面積，計(jì)算經(jīng)提取處理和未經(jīng)處理的峰面積比值得絕對回收率，結(jié)果見表2。本法相對回收率略偏高，但精密度好，絕對回收率高，能夠用于血藥濃度測定。表2 CTZ絕對回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)

　　1.6 精密度試驗(yàn)

　　取空白血漿加入標(biāo)準(zhǔn)液使成100、1 600、3 200 ng/mL，按“樣品處理方法”每樣3份于一日進(jìn)樣，計(jì)算日內(nèi)差，3個濃度的日內(nèi)差RSD分別為2.06%，2.09%和2.38%。連續(xù)3天，上述3種濃度每天進(jìn)樣1次，計(jì)算日間差，3個濃度的日間差RSD分別為3.35%，3.32%和2.26%。

　　1.7 最低檢出濃度

　　配制5、10、15、20 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，按“樣品處理方法”進(jìn)行處理后進(jìn)樣分析，按CTZ的峰高與噪音(S/N)比為3，得本法的最低檢出濃度為15 ng/mL。

　　2 Beagle犬體內(nèi)藥物代動學(xué)和生物利用度實(shí)驗(yàn)

　　2.1 給藥方案

　　采用雙周期交叉試驗(yàn)，Beagle犬6只(廣東省醫(yī)藥工業(yè)研究所) ，平均體質(zhì)量12.9 kg，隨機(jī)分成A、B兩組。給藥前夜禁食，犬A1、A2和A3給予對照片兩片(ZyrtecD,CTZ 10mg)，另一組犬B1、B2和B3給予自制緩釋片兩片(CTZ 10 mg)。服藥后于第0.25、0.5、1.5、1、2、3、4、9、14、24、32、48 h靜脈采血4 mL左右于10 mL已涂有肝素離心管中，離心后分離出的血漿于-20 ℃低溫保存至測定。1周后兩組進(jìn)行交叉試驗(yàn)，A1、A2和A3給予自制緩釋片兩片，B1、B2和B3給予對照片兩片，采血及血漿分離方法相同。

　　2.2 血藥經(jīng)時曲線圖

　　血藥經(jīng)時曲線見圖3，自制片和對照片達(dá)峰時間相同，峰濃度相近，自制片CTZ初期的血藥濃度略高于對照片，但最終趨于一致。

　　2.3 藥動學(xué)參數(shù)

　　使用3p97進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，根據(jù)擬合度最優(yōu)和AIC最小原則，當(dāng)取權(quán)重[1/C]/C之一時，擬合度最優(yōu)和AIC值最小，CTZ在Beagle犬體內(nèi)呈二室模型。在此模型下，由平均血藥濃度計(jì)算得到藥動學(xué)參數(shù)見表3。自制片CTZ滯后時間短，前期血藥濃度高，清除率和藥-時曲線下面積也較接近，提示兩者在體內(nèi)吸收，代謝過程相似。

　　2.4 統(tǒng)計(jì)矩結(jié)果

　　統(tǒng)計(jì)矩不依賴于房室模型，估算藥動學(xué)參數(shù)是建立在藥-時曲線下面積基礎(chǔ)上的，可適用于任何線性動力學(xué)特性的房室模型，可用于估算藥物制劑的生物利用度等藥動學(xué)參數(shù)。由表4可見自制片和對照片中CTZ的AUC，MRT相近，也提示CTZ的吸收和代謝過程相似。表3 CTZ的藥動學(xué)參數(shù)(略)表4 CTZ的統(tǒng)計(jì)矩估算結(jié)果(略)

　　2.5 相對生物利用度和生物等效性

　　按FRel=AUCtest(0→∞)[]AUCref(0→∞)×100%計(jì)算自制片相對于對照片的生物利用度(表5)，結(jié)果CTZ相對生物利用度為93.0%，兩組之間進(jìn)行T檢驗(yàn)的P=0.064>005，無顯著性差異。表5 CTZ的相對生物利用度計(jì)算結(jié)果(略)

　　3 小 結(jié)

　　從血漿中提取藥物過程中因混合和轉(zhuǎn)移等因素的影響，會使提取不能完全一致，采用內(nèi)標(biāo)法可避免這些因素引起的誤差。本文建立的方法能夠適用于測定CTZ在Beagle犬血漿藥物濃度，快速重現(xiàn)性好。設(shè)計(jì)雙交叉實(shí)驗(yàn)，測定了自制緩釋片中CTZ相對于對照片相對生物利用度，并進(jìn)行房室模型嵌合和藥物動力學(xué)參數(shù)的估算，結(jié)果CTZ呈二室模型，CTZ的相對生物利用度為93.0，自制片與對照片生物利用度差異無顯著性。

　　參考文獻(xiàn):

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