- 相關(guān)推薦
簡(jiǎn)述梨黑星病菌的分離培養(yǎng)和基質(zhì)研究
[論文關(guān)鍵詞] 梨黑星病菌 培養(yǎng)基質(zhì) 苦皮藤
[論文摘要] 用18種培養(yǎng)基對(duì)梨黑星病菌進(jìn)行分離培養(yǎng)結(jié)果表明,用PDA、改進(jìn)PDA及PSA培養(yǎng)較易分離成功,在改進(jìn)PDA+L′中營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)速率最大,20℃下培養(yǎng)20 d菌落直徑可達(dá)12 mm,并產(chǎn)生分生孢子。效測(cè)定試驗(yàn)表明,10.0μg/mL的70%代森錳鋅或5%殺菌清水劑及5.0μg/mL的植物制劑20%苦皮藤水浸液,對(duì)梨黑星病菌分生孢子萌發(fā)有很高的抑制作用,抑制率分別達(dá)100%,100%和78.71%。
梨黑星病(Venturia prinaAderh)是我國(guó)南北梨產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的重要病害之一。近年來(lái),由于種植結(jié)構(gòu)和品種布局的變化,常導(dǎo)致梨黑星病大流行。梨黑星病不僅危害葉片、葉柄、嫩枝和果實(shí),而且常引起葉片早期脫落、果實(shí)畸形,造成品質(zhì)和產(chǎn)量下降,嚴(yán)重影響樹勢(shì)和梨業(yè)生產(chǎn)。而該菌目前分離培養(yǎng)較困難,人工培養(yǎng)下生長(zhǎng)緩慢,對(duì)研究該菌的生理生化特點(diǎn)、侵染發(fā)病規(guī)律、室內(nèi)外藥效試驗(yàn)等帶來(lái)不便。為此,作者等嘗試篩選適宜于該菌分離和生長(zhǎng)的培養(yǎng)基及有效的殺菌劑。
1 與方法
1.1 材料
1.1.1 供試病原菌 分別采自陜西楊陵、彬縣、乾縣果園。
1.1.2 供試培養(yǎng)基 先后共試用了18種固定配方與改良配方培養(yǎng)基,其配方如下:(1)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA);(2)馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基(PSA);(3)梨葉浸汁麥芽浸膏培養(yǎng)基(LY);(4)梨果浸汁麥芽浸膏培養(yǎng)基(LG);(5)PDA+梨果汁培養(yǎng)基(PDA+G);(6)甘氨酸等微量元素瓊脂培養(yǎng)基(A);(7)PSA+梨果汁培養(yǎng)基(PSA+G);(8)PSA+梨塊培養(yǎng)基(PSA+L);(9)PDA+熟梨塊培養(yǎng)基(PDA +L′);(10)PSA+胡蘿卜塊培養(yǎng)基(PSA+H);(11)PDA+熟胡蘿卜塊培養(yǎng)基(PDA+H′);(12)木糖培養(yǎng)基(MD);(13)多種培養(yǎng)液(PB、PDB);(14)燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(Y);(15)V8瓊脂培養(yǎng)基(V8);(16)麥芽膏瓊脂培養(yǎng)基(M);(17)牛肉浸膏瓊脂培養(yǎng)基(N);(18)瓊脂培養(yǎng)基(Q)。其中,PB、PDB為液體培養(yǎng)基,其余均為固體培養(yǎng)基。
1.1.3 供試 70%代森錳鋅、5%殺菌清水劑和12.5%烯唑醇均為市售,植物制劑20%苦皮藤水浸液由西北科技大學(xué)農(nóng)藥研究所提供。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 病菌分離 在上述17種固體培養(yǎng)基上,分別用常規(guī)組織分離法和單孢分離法[1,2]對(duì)所采病葉進(jìn)行分離,每種培養(yǎng)基分3皿,每皿內(nèi)放材料9塊(單孢挑9個(gè)),于10,15,20,25,30℃5種溫度下培養(yǎng),選擇最適溫度,并將分離物進(jìn)行活體定點(diǎn)接種。
1.2.2 病菌在不同基質(zhì)上生長(zhǎng)速率測(cè)定 將分離物制成φ=4 mm的菌餅,接入上述18種培養(yǎng)基,每處理重復(fù)3次,20℃下黑暗培養(yǎng),觀察菌絲生長(zhǎng)情況。
1.2.3 藥效測(cè)定 用孢子萌發(fā)法[1,2]測(cè)定70%代森錳鋅、5%殺菌清水劑、12.5%烯唑醇、植物制劑20%苦皮藤水浸液對(duì)梨黑星病菌的抑制作用。4種藥劑均設(shè)置0.625,1.25,2.5,5.0和10.0μg/mL 5個(gè)濃度,以清水為對(duì)照,置20~23℃下培養(yǎng)12 h。萌發(fā)百分率及抑制率計(jì)算公式如下:
2 結(jié)果與分析
2.1 分離基質(zhì)篩選
各種培養(yǎng)基上的分離結(jié)果表明,在PDA+G、PSA、PDA、PSA+G、PSA+L、PSA+H、PDA+L′培養(yǎng)基上,以組織分離法可獲得梨黑星病菌。單孢分離僅在PDA+G、PSA、PDA培養(yǎng)基上見(jiàn)到極少菌落,在LY、LG培養(yǎng)基上采用組織分離法所獲病菌生長(zhǎng)極弱,在V8、Y、M、A、LG、LY、N等其余供試培養(yǎng)基上病菌生長(zhǎng)緩慢,且易被雜菌污染。將所得分離物接種于楊陵果園的梨樹葉片上,15 d觀察到產(chǎn)生的分生孢子,證明分離成功。比較5種不同的溫度處理在PDA培養(yǎng)基上對(duì)梨黑星病菌生長(zhǎng)的影響(表1),結(jié)果表明,梨黑星病菌分離培養(yǎng)的最適溫度為20~25℃,15℃以下及超過(guò)25℃時(shí),生長(zhǎng)緩慢。
2.2 病菌在不同培養(yǎng)基質(zhì)上的生長(zhǎng)情況比較
培養(yǎng)基質(zhì)比較試驗(yàn)結(jié)果(表2)表明,梨黑星病菌在PDA+L′上生長(zhǎng)最快,一般20 d菌落直徑可達(dá)12 mm,在PDA+H′、PSA及A上次之,G上生長(zhǎng)最慢。由于在其余培養(yǎng)基上生長(zhǎng)極為緩慢,故未再列表贅述。
2.3 效測(cè)定
表3表明,70%代森錳鋅10.0μg/mL和5%殺菌清水劑10.0μg/mL,對(duì)梨黑星孢子萌發(fā)的抑制率均高達(dá)100%,效果明顯優(yōu)于其他農(nóng)藥。植物制劑20%苦皮藤水浸液5. 0μg/mL抑制率也可達(dá)78.71%,這說(shuō)明該植物制劑在防治梨黑星病中有很大潛力。
3 討論
用17種培養(yǎng)基對(duì)梨黑星病菌進(jìn)行分離的結(jié)果表明,PDA、改進(jìn)PDA及PSA較易分離成功,組織分離法的成功率高于單孢分離法。其成功率的高低還與所采的新鮮程度關(guān)系密切,試驗(yàn)表明,如果在發(fā)病初期采褪綠斑或是剛產(chǎn)生微薄霉層的標(biāo)本,隨采隨分成功率可達(dá)90%以上,反之,成功率很低。據(jù)有關(guān)資料報(bào)道,分離時(shí)采用麥芽瓊脂培養(yǎng)基成功率最高[3],進(jìn)入夏季不宜用單孢分離法。本研究結(jié)果表明,只要分離過(guò)程中消毒時(shí)間掌握好,將pH值調(diào)節(jié)到適宜于該菌生長(zhǎng)的偏酸中,一般在該菌發(fā)生時(shí)間(4~10月)[4]采集的標(biāo)本用上述PDA+G、PSA、PDA、PSA+G、PSA+L、PAS+H、PHA+L′等培養(yǎng)基進(jìn)行組織分離均可獲得成功,而且很少有污染,20℃下7~10 d菌落直徑可達(dá)3~4 mm,并產(chǎn)生少量分生孢子。本試驗(yàn)中也采用黑光燈照射,意在誘導(dǎo)產(chǎn)孢[5],但發(fā)現(xiàn)其對(duì)該菌的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用,對(duì)產(chǎn)孢效果卻不理想。另外,利用無(wú)糖PB或降低糖含量的PDB進(jìn)行培養(yǎng),菌絲生長(zhǎng)也較快,10 d菌落直徑可達(dá)9~10 mm(用十字交叉法,從瓶底測(cè)量其菌落直徑[1,2])。說(shuō)明該菌在無(wú)糖或少糖條件下,有利于營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)。雖然已有資料研究出了產(chǎn)孢方法[6],但產(chǎn)孢量仍很少,室內(nèi)藥效試驗(yàn)還有賴于田間發(fā)病后采集的標(biāo)本。其分離物的產(chǎn)孢機(jī)理、培養(yǎng)時(shí)需黑光還是黑暗、或是散光、以及基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)等條件,均有待于進(jìn)一步研究。
在藥效測(cè)定試驗(yàn)中,10.0μg/mL 70%代森錳鋅和10.0μg/mL 5%殺菌清水劑對(duì)梨黑星孢子的萌發(fā)抑制率均高達(dá)100%。植物制劑20%苦皮藤水浸液5.0μg/mL抑制率也達(dá)78.71%,雖低于試驗(yàn)中的化學(xué)農(nóng)藥,但其低毒、低殘留、對(duì)環(huán)境無(wú)污染,且低,在殺菌劑領(lǐng)域具有很大的發(fā)展?jié)摿�。如果將該試劑的濃度加大是否也能達(dá)到與化學(xué)制劑相同或近似的效果,有待于進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí)。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 方中達(dá).植病研究方法[M].北京:中國(guó)出版社,1996.
[2] 孫廣宇,宗兆鋒.植物病實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2000.
[3] 曲儉緒.梨黑星病菌培養(yǎng)基的比較研究[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào),1987,9(2):179-180.
[4] 李建榮,石萬(wàn)成,文純友,等.梨黑星病發(fā)生規(guī)律初步研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1996,18(6):511-514.
[5] 范燕萍,冷懷瓊.梨黑星病菌的產(chǎn)孢研究[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1991,9(2):291-296.
[6] 李保華,趙美琦,張美蓉,等.梨黑星病菌分生孢子侵染及產(chǎn)孢研究[J].植物病理學(xué)報(bào),1998,28(4):297-298.
【簡(jiǎn)述梨黑星病菌的分離培養(yǎng)和基質(zhì)研究】相關(guān)文章：
關(guān)于幾種脫毒小薯培養(yǎng)基質(zhì)的比較研究03-01
關(guān)于馬鈴薯微型薯生產(chǎn)培養(yǎng)基質(zhì)的篩選研究03-01
輸電線路減振研究簡(jiǎn)述03-16
研究外語(yǔ)能力的培養(yǎng)03-18
運(yùn)用電教培養(yǎng)學(xué)生解決問(wèn)題能力的研究和實(shí)踐03-06
探討改進(jìn)研究生培養(yǎng)模式 提高研究生培養(yǎng)質(zhì)量03-18
不同培養(yǎng)基質(zhì)對(duì)興安落葉松容器苗生長(zhǎng)的影響03-17