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探討寶寶樂口服液對瘦素調(diào)節(jié)VMN神經(jīng)元膜電位的影響
摘要: 目的 研究寶寶樂口服液對瘦素調(diào)節(jié)下丘腦腹內(nèi)側(cè)核(VMH)神經(jīng)元膜電位的影響。方法 利用紅外可視腦片膜片鉗技術(shù)記錄對照組、厭食組和治療組三組模型動(dòng)物VMN神經(jīng)元的膜電位，分析瘦素及寶寶樂口服液對VMN神經(jīng)元膜電位的影響。結(jié)果 瘦素使三組動(dòng)物大部分神經(jīng)元去極化，各組間比較差異無顯著性。少數(shù)VMN神經(jīng)元在瘦素作用下超極化，各組間比較差異亦無顯著性。但模型組VMN神經(jīng)元的膜電位被瘦素去極化而導(dǎo)致自發(fā)放電增加的細(xì)胞比例增多，被瘦素超極化而自發(fā)放電減少的細(xì)胞比例減少，對瘦素?zé)o反應(yīng)的細(xì)胞比例也減少；而治療組去極化、超極化和無反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)與對照組差異無顯著性。結(jié)論 寶寶樂口服液能夠通過影響降低VMN對瘦素的整體敏感性，使VMN發(fā)出適度的飽信號，從而恢復(fù)正常的食欲和攝食量。
關(guān)鍵詞: 寶寶樂口服液 下丘腦腹內(nèi)側(cè)核 膜電位 膜片鉗
小兒厭食是常見的攝食行為異常，發(fā)生率約為12%～34%，對兒童生長發(fā)育影響較大，對小兒厭食發(fā)生發(fā)展及其特效療法的深入研究將有助于推動(dòng)人類對攝食生理調(diào)控機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識和提高兒童健康水平［1］。近20年來，國內(nèi)學(xué)者廣泛使用以恢復(fù)脾胃運(yùn)轉(zhuǎn)之機(jī)，使脾胃調(diào)和、脾運(yùn)復(fù)健為主要目的的運(yùn)脾法為治則，治療小兒厭食取得很好療效，并系統(tǒng)研究了運(yùn)脾法對消化吸收功能的影響，在外周水平上證實(shí)運(yùn)脾法對胃腸道的運(yùn)動(dòng)和分泌有顯著的調(diào)節(jié)作用［2］。在以往的研究中，我們采用病因模擬法成功制作了幼齡大鼠厭食模型［3］，并就運(yùn)脾復(fù)方對該模型中樞和外周胃腸激素的調(diào)節(jié)作用［4］、對厭食大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核（ventromedial hypothalamic nuclui，VMN）神經(jīng)元外周攝食負(fù)反饋信息的敏感性的影響進(jìn)行了研究，取得了一些成果［5］。為進(jìn)一步探討小兒厭食癥的發(fā)病機(jī)制和運(yùn)脾復(fù)方的作用機(jī)制，觀察了運(yùn)脾復(fù)方寶寶樂口服液對瘦素調(diào)節(jié)VMN神經(jīng)元膜電位的影響。
1 材料與方法
1.1 動(dòng)物及分組
日齡35～40 d的SD大鼠45只，平均體質(zhì)量(60±10)g（第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），合格證號SCXK（軍）2007?07。隨機(jī)分為對照組、模型組和治療組，每組15只。所有動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食水。
1.2 模型制備和藥物治療
按文獻(xiàn)方法［3］ 制做厭食大鼠模型。即用正常鼠飼料喂養(yǎng)對照組大鼠，用特制飼料喂養(yǎng)模型組和治療組大鼠。1周后特制飼料喂養(yǎng)的大鼠日攝食量下降30%以上，體質(zhì)量下降15%以上，表明模型制備成功。從實(shí)驗(yàn)第8天開始，治療組大鼠用運(yùn)脾復(fù)方寶寶樂口服液（第四軍醫(yī)大學(xué)科西京醫(yī)院藥劑科提供，藥物組成：蒼術(shù)、焦山楂、黃芪、黨參、陳皮各10 g,白芍、決明子、煅龍骨、煅牡蠣各20 g）灌胃，每日1次，劑量為3.76 g/100 g(為臨床2倍等效量)，同時(shí)給予對照組和模型組大鼠等容積生理鹽水灌胃，連續(xù)3周。
1.3 膜片鉗記錄
大鼠腹腔注射10%(φ)水合氯醛（0.33 mL/100 g），麻醉后斷頭取腦，迅速置于冰水混合的細(xì)胞外液（NaCl 126，KCl 2.5，Na2HPO4 1.2， NaHCO3 24，Glucose 11.1，MgSO4 1.2，CaCl2 2.4，單位mmol·L-1，pH7.2～7.4，滲透壓濃度299 mOsm）中充氧（95%O2和5%CO2，下同）1 min，移至振動(dòng)切片機(jī)（機(jī)槽內(nèi)注滿持續(xù)充氧的冰水細(xì)胞外液）做200 μm厚的橫切面腦片，置入28 ℃持續(xù)充氧的細(xì)胞外液中孵育1 h，然后在正置纖維鏡（Axoskop I；Zeiss，Thornwood，NY）水浸鏡頭下進(jìn)行可視膜片鉗記錄，膜片鉗放大器使用MultiClamp 700B（Axon Instruments，美國）。pClamp8軟件（Axon Instrument，F(xiàn)oster City，CA）用來記錄和分析數(shù)據(jù)。
全細(xì)胞記錄（whole cell patch）使用的電極內(nèi)液成分(單位:mmol·L-1)為：K?gluconate132.3，NaCl 4，CaCl2 0.5，Hepes 10，EGTA 5，ATP?Mg 4，GTP?Na 0.5，Phosphocretin 10，pH 7.2～7.3，滲透壓280 mOsm，充灌電極后的電極電阻為6～8 MΩ。電極尖端與細(xì)胞膜形成高阻封接（達(dá)1～10 GΩ），然后吸破細(xì)胞膜，在電流鉗gapfree狀態(tài)下持續(xù)記錄膜電位，觀察瘦素（Leptin，50 nmol·L-1）對VMN神經(jīng)元膜電位的影響，取給藥前5 min的基礎(chǔ)膜電位與給藥最后1min的膜電位進(jìn)行比較。
所有的化學(xué)試劑和藥理試劑均購自Sigma公司。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s) 表示,采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn),以P
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