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HPLC法測(cè)定雙黃連顆粒中連翹苷的含量
雙黃連顆粒是由金銀花、黃芩、連翹制成的純中藥制劑，具有疏風(fēng)解表、清熱解毒的功效。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2005年版一部，但標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有連翹的含量測(cè)定方法，不能有效的控制藥品質(zhì)量。方中連翹含量最大，具有清熱解毒、消腫散結(jié)的作用，其有效成分為連翹苷。為有效控制藥品質(zhì)量，我們?cè)囉肏PLC法測(cè)定雙黃連顆粒中連翹苷的含量，取得良好效果。
1 儀器與試藥
Agilent Technologies 1200 Series 高效液相色譜儀，Agilent Technologies G1314B VWD 檢測(cè)器,色譜工作站：LabAlliance PC 2000分析之星，連翹苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0821 200104);雙黃連顆粒(批號(hào)20060612、20060816、20060824，哈藥集團(tuán)制藥六廠(chǎng));甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱KromasilC18(4.6×200 mm，5 μm)，流動(dòng)相乙腈 水(25∶75)，流速1 0 ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 μl。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取80℃干燥至恒重的連翹苷對(duì)照品5.65 mg，置于100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。
2.2.2 樣品溶液的制備：精密稱(chēng)取本品粉末3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，稱(chēng)定質(zhì)量，浸漬過(guò)夜，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減少的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 ml，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5 g，拌勻，加置中性氧化鋁柱(100～120目，2 g，內(nèi)徑1 cm)上，用70%乙醇50 ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
2.2.3 陰性對(duì)照液：取缺連翹的處方藥，按樣品溶液制備方法制備陰性對(duì)照液。
2.3 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，1，2，4，6，8，10 ml分別置50 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述方法進(jìn)樣20 μl，依法測(cè)定，外表法計(jì)算，以峰面積Y對(duì)濃度X(μg/ml)得線(xiàn)性回歸方程：Y=6.145×104X-2.736×102,r=0.9999。結(jié)果表明，連翹苷在0.18～1.25 μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。
2.4 精密度考察 取同一對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20 μl，連翹苷峰面積均值為461740，其RSD=1.12%。
2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批號(hào)樣品5份，按供試品制備方法制備，依法測(cè)定，結(jié)果連翹苷平均含量是0 84 mg/g，其RSD=1 35%。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液在0、2、4、6、8、10、12 h分別進(jìn)樣20 μl，依法測(cè)定，結(jié)果7次測(cè)定連翹苷峰面積均值為621758，RSD=0.81%。
2.7 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的樣品適量，精密稱(chēng)定，精密加入連翹苷對(duì)照品適量，按2.2.2樣品溶液制備方法制備回收試驗(yàn)液，按2.8樣品測(cè)定方法測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表1。表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果樣品含量
2.8 樣品測(cè)定 取對(duì)照品溶液和樣品溶液用0 45 μm微孔濾膜濾過(guò)，各進(jìn)樣20 μl，讀取峰面積，按外表法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。表2 樣品中連翹苷的測(cè)定結(jié)果批號(hào)
3 討論
用HPLC法測(cè)定連翹苷含量，試驗(yàn)比較了多種比例的流動(dòng)相，以乙腈 水(25∶75)為優(yōu)，保留時(shí)間適中。本試驗(yàn)采用中性氧化鋁洗脫，可以除去雜質(zhì)，70%乙醇可以完全洗脫連翹苷，并可以制成近無(wú)色的供試品溶液，這樣有利于分離和保護(hù)色譜柱。該方法簡(jiǎn)便可靠，精密度高，分離度好，可用于小兒感冒顆粒等的質(zhì)量控制。
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