高效液相色譜法測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量

時(shí)間：2023-03-16 08:10:35 藥學(xué)畢業(yè)論文我要投稿

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　　【摘要】目的建立高效液相色譜法測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量。方法采用Agilengt Eclipse Plus -C18色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(14：86);流速：0.6 ml•min-1;檢測波長230 nm。結(jié)果芍藥苷在0.4800～8.160 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均回收率為98.94%，RSD=0.36%(n=6)。結(jié)論本方法操作簡便，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量。

　　【關(guān)鍵詞】芎鉤天麻丸;含量測定;芍藥苷;高效液相色譜法

　　[Abstract] Objective To establish a HPLC method for the determination of Paeoniflorin in xionggoutianma pills. Methods The chromatographic system consisted of C18 column,using Acetonitrile -0.1% Phosphate (14：86) as mobile phase.The content was detected at a waveleng of 230nm,the flow rate was 0.6ml•min-1 .Results The Paeoniflorin have a good tincar rolatim in the range of0.0433～0.6938μg(r=0.9999),the average recovery was 98.94%，RSD=0.36%(n=6). Conolusion The established method is accuracy ,sensitive and simple.It can be used for quality control of xionggoutianma pills.

　　[Keywords] xionggoutianma pills; Chlorogenic acid; content determination; HPLC

　　芎鉤天麻丸是由川芎、鉤藤、當(dāng)歸、石決明、桑寄生、細(xì)辛、珍珠母、黃芩、白芍、天麻等14 味藥材加工制成的醫(yī)院制劑，具有滋腎平肝、潛陽熄風(fēng)、除暈止痛、降血壓之功效，主治肝陽上亢、血虛失養(yǎng)引起的高血壓，緊張性、血管性神經(jīng)性頭疼、頭暈 [1]。白芍為方中君藥，芍藥苷為白芍的主要有效成分，具有擴(kuò)張血管、保護(hù)腦缺血、抗血栓、抗血小板聚集、抗高血脂等作用，對(duì)芎鉤天麻丸療效的發(fā)揮起重要作用�，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載含量測定項(xiàng)目，不能有效的控制藥品質(zhì)量。本文以芍藥苷為指標(biāo)成分，建立了測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的高效液相測定法，為該制劑的質(zhì)量控制提供了客觀的含量評(píng)價(jià)方法。

　　1 儀器與試藥

　　1.1 儀器

　　Agilengt 1260高效液相色譜儀，AUW-220 D電子分析天平 DSQ10260超聲儀。

　　1.2 試藥

　　芍藥苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110736-201035);乙腈為色譜純，水為本單位自制重蒸餾水，其余試劑為分析純。芎鉤天麻丸由柘城縣人民醫(yī)院提供。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件

　　色譜柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱(4.6×100 mm)

　　流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(14：86)為流動(dòng)相[2];流速0.6 ml•min-1;檢測波長230 nm;進(jìn)樣量10 μl;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000[3]。

　　2.2 線性關(guān)系考察

　　取黃芩苷對(duì)照品約12.0 mg，精密稱定，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣1、3、5、7、9、11、 13、15、17 μl，記錄芍藥苷峰面積值，以峰面積積分值(Y)對(duì)對(duì)照品濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程： Y=235.05674X+12.52003 r=0.9999。結(jié)果表明，黃芩苷對(duì)照品在0.4800～8.1600 μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

　　2.3 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備

　　取本品約0.1 g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，浸泡4 小時(shí)，超聲處理20 分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45 um微孔濾膜濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。另取缺白芍的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對(duì)照溶液。

　　2.4 干擾試驗(yàn)

　　取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10 μl，按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，黃芩苷的保留時(shí)間為8.818 min，理論塔板數(shù)為3512，黃芩苷與相鄰峰的分離度大于1.5，峰型對(duì)稱。陰性樣品無干擾，結(jié)果見圖1。

　　C陰性對(duì)照溶液

　　圖1 高效液相色譜圖

　　2.5 精密度試驗(yàn)

　　取2.2對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6 次，每次10 μl，記錄綠原酸峰面積，RSD=0.39%(n=6)，表明精密度良好。

　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取同一對(duì)照品溶液，分別在0、2、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣測定，RSD=0.43%，供試品溶液在24 小時(shí)內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

　　2.7 加樣回收率試驗(yàn)

　　稱取6 份已知含量為6.173 mg/g的樣品約0.05 g，精密稱定，分別置1～6 號(hào)錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液1 ml，按照“2.4”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備溶液，按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別測定，結(jié)果見表1。

　　表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

　　稱樣量樣中黃芩苷的含量對(duì)照加入量測得黃芩苷的含量回收率平均回收率 RSD

　　(g) (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)

　　0.05132 0.3168 0.4800 0.7904 99.20