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中藥蛇膽的鑒別及質量控制現狀
【摘要】 蛇膽是一味具有止咳平喘消炎功效的傳統(tǒng)中藥，近年來隨著蛇膽資源的縮減，市售蛇膽的偽品漸增。本文綜述蛇膽鑒別和質量控制的現狀，展望今后研究的方向，為蛇膽的質量控制提供有益的參考。
【關鍵詞】 蛇膽; 鑒別; 質量控制
AbstractSnake gallbladder is a traditional Chinese medicine for treating cough,asthma,and inflammation,etc. More and more fakes appeared in the market as natural resources had kept decreasing in recent years. This article summarized the biological characteristic of snake gallbladder,and the latest progress in the study on identification and quality control,and its extensive application in basic research and clinical application were reviewed.
Key words:snake gallbladder; identification; quality control
蛇膽自古以來就是一味名貴藥材，廣泛應用于臨床。蛇膽的藥用，最早見載于漢朝《名醫(yī)別錄》，當時僅收載蚺蛇膽與蝮蛇膽2種[1]。2010年版《中華人民共和國藥典》收載蛇膽的來源應為眼鏡蛇科(Elapidae)、游蛇科(Megapodiidae)或蝰蛇科(Viperidae)多種動物的膽。蛇膽性涼，味苦微甘，有行氣祛痰，祛風去濕之功效，用于治療咳嗽多痰、目赤腫痛、皮膚熱毒、口眼生瘡、肺熱咳嗽、胃熱疼痛、肝熱目赤、急性風濕性關節(jié)炎和痔瘡等。市場上含蛇膽的中藥制劑較多，常見的有蛇膽川貝散、蛇膽陳皮末、蛇膽追風丸、蛇膽川貝枇杷膏等。
由于蛇膽具有獨特的藥用價值，加上市場需求量大，自然資源遞減，市場上蛇膽的偽品時有發(fā)現，已報道的摻假物有雞、鴨、魚、豬、牛等動物膽汁和淀粉糊、青菜汁、明膠液、色素以及熟地黃提取液等[2]，以及油膽(用機油刺激蛇鼻腔或蛇體，使膽汁增多而質差)或蜜膽或將蛇膽多次浸泡，再把蛇膽與酒液分別出售使膽汁稀薄質差[3-4]。因此，在藥用和收購上，應正確地鑒別各種蛇膽，從源頭上控制藥品質量和保障用藥安全。多年來，國內外研究者一直致力于運用各種分析方法進行蛇膽的質量控制研究。本文將近年來蛇膽質量控制的研究進展綜述如下。
1蛇膽的鑒別現狀
1.1性狀鑒別
蛇膽的性狀鑒別是根據膽囊的外形特征、色澤、大小、質地、膽蒂位置、膽管(形狀、長度及韌性)、膽汁稠度、氣味等進行比較的鑒別方法。蔣碧英[5]描述了正品蛇膽的性狀鑒別要點;張穗[3]對14種蛇膽及其常見偽劣品進行了外觀性狀鑒別。這種傳統(tǒng)手段簡單方便，可直觀地將蛇膽與一般偽品區(qū)別開來，在早期藥材收購、加工部門的現場鑒定中較常使用;但由于蛇膽的形態(tài)學特征往往因加工方法和條件不同而變化，鑒別效果因人不同(經驗、主觀影響等)，因蛇而異(蛇的種類、大小、生理狀態(tài)等)，因觀察環(huán)境(季節(jié)、光線等)而變化，誤差較大，現階段僅作為真?zhèn)舞b別的參考指標。
1.2顯微鑒別
根據蛇膽的組織殘片、細胞或內含物等特征進行顯微鑒別是蛇膽原藥材鑒別的方法之一。楊育民等[6]依據蛇膽內含物的形狀、大小及顏色等顯微特征鑒別了蛇膽及其偽充品鑒別;陸惠文[7]根據蛇膽與偽品等各自的組織學特點將待檢膽囊標本制成石蠟切片，經HE染色和顯微觀察，鑒別了蛇膽(眼鏡蛇、金環(huán)蛇、灰鼠蛇等)與偽品蛇膽(雞膽、青魚膽等)。該法雖鑒別效果較好且簡便，但僅適用于仍保留有顯微特征的原料藥材和成藥。由于膽的內含物隨著蛇的生理狀態(tài)不同而有差異，組織學特征也因切片的取材位置不同而不同，因此增加了鑒別的難度;此外，目前大多數含蛇膽成藥不保留蛇膽的顯微特征，故此法不宜推廣。
1.3理化鑒別
蛇膽的主要成分有膽汁酸、膽色素、膽固醇、黏蛋白、無機鹽等，通常膽汁酸被認為是其藥理作用的主要功效物質。蛇膽膽汁酸主要為�；悄懰帷⑴；撬狴Z去氧膽酸、�；侨パ跄懰帷⑹懰�、游離膽酸等，目前多以這些成分為指標對蛇膽汁進行質量控制。
理化鑒別中常用的分析方法有化學分析法和薄層色譜法。蔣三員等[8]通過比較蛇、雞、鴨、魚膽汁的比黏度、鉀、鈉含量等鑒別了蛇膽。黎源等[9]對比了蛇膽汁和雞膽汁中的氨基酸及微量元素，發(fā)現蛇膽汁與雞膽汁均含有18種氨基酸，雞膽汁中除了牛磺酸含量略低于蛇膽汁外，其他氨基酸的種類和含量非常相似;蛇膽汁中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu的含量均略高于雞膽汁。黃曉文等[10]通過膽囊外觀性狀，膽汁的K2Cr2O7沉淀、糠醛-硫酸顯色反應以及薄層色譜法(TLC)，鑒別了眼鏡蛇膽檢品，認為該方法簡單、專屬性強，可作為真?zhèn)紊吣懙蔫b別方法。植達詩[11]用糠醛-硫酸法鑒別了蛇膽及其偽品雞膽、鴨膽、魚膽等;鐘榮華[12]用糠醛-硫酸法成功鑒別了蛇膽、雞膽、鴨膽和黃鱔膽等，認為該法結果可靠，簡便易行，但不能鑒別蛇類種屬。薄層層析法由于具備色譜分離特性，因此更適合分析復雜樣品。孫方人等[13]以�；悄懰釣閷φ沼帽訉游龇ǚ治隽搜坨R蛇蛇膽樣品并見到8個顯色斑點;游勇基等[14]及唐元軍等[15]分別用TLC法鑒別了蟒蛇膽;薛漓[2]還用TLC法成功鑒別了蛇膽及特殊偽品——熟地黃提取液。此外，TLC法還被廣泛用于蛇膽復方制劑的鑒別研究。萬京樺等[16]構建了蛇膽川貝枇杷膏中蛇膽汁的TLC法鑒別方法;陳德球[17]用蛇膽汁及�；悄懰徕c作對照，采用TLC法鑒別蛇膽川貝液中的蛇膽;管玉民[18]用TLC法鑒別了蛇膽川貝液處方中的蛇膽汁;王倩等[19]用TLC法從蛇膽追風丸中成功檢測出了蛇膽;蔣偉杰等[20]用TLC法從蛇膽菠蘿蛋白酶腸溶薄膜衣片中鑒別出了蛇膽。綜上所述，牛磺膽酸等成分為對照用TLC法可有效鑒別出復方制劑中的蛇膽，但不能區(qū)別蛇膽的種屬來源。
1.4分子生物學鑒定
由于蛇膽保存和制劑加工過程中的處理方法往往破壞了蛇膽的完整性，因此依據性狀、顯微特征及理化性質進行鑒別有一定困難，分子生物學方法能克服上述問題，呈現更客觀的結果。眾所周知，物種的多樣性是基因多態(tài)性的結果，而基因多態(tài)性可在分子水平上檢測，它比在形態(tài)、組織和化學水平上檢測更能代表其變異類型的遺傳標記。王義權等[21]將分子標記技術運用到蛇類藥材的鑒定研究中，對游蛇科10種蛇基因組DNA的多態(tài)性進行了分子遺傳標記的研究;通過提取金錢白花蛇及其偽品藥材和原動物樣品的模板DNA，分析其Cytb基因片斷鑒別了金錢白花蛇[22];沈曦等[23]通過比較12SrRNA和Cytb基因的部分序列鑒別了幾種蝮屬蛇類;劉向華等[24]從藥材蛇膽的膽衣和膽汁、原動物棕黑錦蛇的肌肉和膽汁中提取DNA，經PCR擴增12SrRNA基因片段，鑒別了蛇類藥材。分子生物學鑒別方法雖能有效鑒別出蛇類藥材的種屬來源，目前在蛇類藥材的鑒別中應用較廣，但由于市售蛇膽樣品的復雜性，蛇膽DNA的含量較低，故此法在蛇膽鑒別中的應用較少，具體應用方案還有待于進一步完善。
2蛇膽及其制劑的含量測定
目前蛇膽藥材及其制劑中蛇膽的含量測定多以總膽酸或�；悄懰猁}為指標，測定方法主要是紫外分光光度法、薄層掃描法(TLCS)和高效液相色譜法(HPLC)。梁意紅[25]、羅敏等[26]、曾常青等[27]先后采用TLCS法測定了蛇膽藥材中牛磺膽酸的含量;殷軍等[28]采用硫酸-糠醛法顯色法測定了蛇膽膽酸的含量;黃西峰等[29]用紫外分光光度法測定了蛇膽中總膽酸的含量;張丹等[30]和鐘然等[31]分別采用HPLC法測定蛇膽中牛黃膽酸的含量。溫金蓮等[32]用分光光度法測定了蛇膽糖漿口服液中膽酸的含量;孔廣英等[33]采用紫外分光光度法測定了牛黃蛇膽川貝液中的總膽酸含量;岑淑姬[34]和黎明[35]分別采用HPLC法和TLCS法測定蛇膽川貝液中牛磺膽酸含量;金陽[36]建立了蛇膽陳皮膠囊的質量標準，采用TLC法鑒別了蛇膽，用HPLC法測定了牛磺膽酸鈉的含量;鄔威堯[37]采用TLCS法測定了蛇膽川貝散中�；悄懰岬暮�;吳兵兵[38]采用HPLC法比較了不同廠家蛇膽川貝膠囊中�；悄懰徕c的含量差異。由于蛇膽功效成分尚不明確，目前蛇膽含量測定所選擇的指標專屬性不強，因此含蛇膽的中藥復方制劑牛黃蛇膽川貝液等的質量標準還有待于進一步提高。
綜上所述，蛇膽的質量控制研究雖歷史悠久，但由于技術方法的制約，目前各種方法均存在一定的缺陷，2010版藥典中亦缺乏較為全面的質量控制方法。隨著研究手段的不斷進步，運用先進的分子生物學手段，采用多種鑒別方法綜合驗證、多指標綜合控制，從而制定更完善的質量標準是今后蛇膽質量控制的必然趨勢。
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