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裸花紫珠水提液的澄清處理技術(shù)探究
吸附澄清法是在中藥提取液或提取濃縮液中加入一種絮凝劑，使體系的澄明度得以提高的一項(xiàng)高新技術(shù)，下面是小編搜集整理的一篇探究裸花紫珠水提液的澄清處理技術(shù)的論文范文，歡迎閱讀查看。
裸花紫珠為馬鞭草科紫珠屬植物裸花紫珠(CallicarpanudifloraHookEtArn.)的干燥葉,其性涼、味苦澀,微辛,具有消炎,解毒,收斂,止血之功效,用于化膿性炎癥,急性傳染性肝炎,外治燒、燙傷,外傷出血等癥[1]。紫珠屬植物的化學(xué)成分研究表明,苯乙醇苷類成分是該屬植物的主要類群成分之一[2]。在前期研究中發(fā)現(xiàn),毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷是裸花紫珠水提液中的主要成分。作為苯乙醇苷的代表性成分,毛蕊花糖苷具有止血[3]、保肝降酶[4-5]、抗菌[6]、抗炎[7]、抗氧化[8]、抗腫瘤[9]等多種藥理作用,可能是其發(fā)揮藥效的主要活性成分。
裸花紫珠水提取液固形物收率在30%以上,其中蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、葉綠素、無機(jī)鹽、重金屬等的含量較高,這些成分多為雜質(zhì)成分或無效成分。為提高裸花紫珠制劑的產(chǎn)品質(zhì)量,有必要對(duì)其水提取液進(jìn)行精制純化,在保留有效成分的同時(shí)最大限度地除雜,并盡可能減少有效成分的損失。目前中藥水提取液常用純化方法有水提醇沉、高速離心、澄清劑吸附、膜分離、大孔吸附樹脂、微濾等[10],而殼聚糖澄清劑對(duì)蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、核酸等物質(zhì)均具有吸附能力,除雜完全,并且能有效保留功能性成分。因此本研究采用殼聚糖澄清技術(shù)對(duì)裸花紫珠水提液進(jìn)行澄清處理,采用正交試驗(yàn)優(yōu)選較佳的澄清工藝條件,為裸花紫珠水提取液進(jìn)一步精制純化奠定基礎(chǔ)。
1材料與方法
1.1儀器LC-2010AHT高效液相色譜儀,配有紫外檢測(cè)器,自動(dòng)進(jìn)樣器,LCsolution色譜工作站(日本島津公司);AL-104電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司);85-2A磁力加熱攪拌器(金壇市城東新瑞儀器有限公司);DK-98-ⅡA型電熱恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司);TDL-5離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);202AB-1電熱干燥箱(上海申光儀器儀表有限公司);九陽電磁爐(九陽股份有限公司)。
1.2材料與試劑裸花紫珠藥材與2013年8月采自海南省白沙縣,經(jīng)鑒定為馬鞭草科紫珠屬植物裸花紫珠(C.nudifloraHookEtArn.)的干燥葉;甲醇,冰醋酸,無水乙醇均為分析純,購自廣州化學(xué)試劑廠;乙腈為色譜純,水為超純水;殼聚糖購自山東奧康生物科技有限公司;毛蕊花糖苷(批號(hào):120804)與異毛蕊花糖苷對(duì)照品(批號(hào):130512)購自四川維克奇生物科技有限公司。
1.3裸花紫珠水提取液的制備取裸花紫珠葉300g,置10L圓底燒瓶中,加入6L蒸餾水浸泡2h,加熱回流提取1h,過濾,濾渣再加蒸餾水加熱回流提取2次,每次4.5L,過濾,合并三次濾液,濃縮至600mL(每毫升水提取液含生藥0.5g),作為原藥液。分別加水稀釋至1∶4(0.25g/mL)、1∶8(0.125g/mL)和1∶12(0.083g/mL)的溶液備用。
1.4殼聚糖溶液的配制取殼聚糖粉末1g,加1%冰醋酸溶液適量,靜置2h,攪拌使其溶解,再加1%冰醋酸溶液至100mL,配成含殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的溶液,靜置24h使充分溶脹,雙層紗布過濾,即得。
1.5毛蕊花糖苷(AS)和異毛蕊花糖苷(IAS)的測(cè)定1.5.1色譜條件色譜柱:LunaC18(2)(150mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相:乙腈-0.1%醋酸溶液(15∶85);流速:1.0mL/min,檢測(cè)波長:332nm;柱溫:30℃。
1.5.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷對(duì)照品,置25mL量瓶中,加50%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,配成每毫升溶液含毛蕊花糖苷0.1044mg,異毛蕊花糖苷0.1024mg的混合對(duì)照品溶液。取適量,過0.45μm微孔濾膜,取續(xù)濾液備用。
1.5.3供試品溶液的制備取裸花紫珠水提取液澄清前后溶液適量,置25mL量瓶中,加入50%甲醇溶液稀釋至刻度,取適量,過0.45μm微孔濾膜,取續(xù)濾液,即得。
1.5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取混合對(duì)照品續(xù)濾液,注入高效液相色譜儀,進(jìn)樣體積分別為1、2、4、8、10、12、16μL,測(cè)定毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷的峰面積,分別以毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷的進(jìn)樣質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得毛蕊花糖苷的回歸方程為YAS=1628385X-22263.7(r=0.9998),線性范圍為0.1044~1.6704μg;異毛蕊花糖苷的回歸方程為YIAS=1458350X-24579.6(r=0.9999),線性范圍為0.1024~1.6384μg。
1.5.5含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各10μL,注入高效液相色譜儀,測(cè)定,記錄色譜圖峰面積,計(jì)算毛蕊花糖苷(AS)和異毛蕊花糖苷(IAS)含量,即得。
1.6評(píng)價(jià)指標(biāo)
1.6.1固形物去除率的測(cè)定精密量取裸花紫珠水提液澄清前后溶液各20mL置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,并于105℃加熱干燥3h,迅速轉(zhuǎn)移至干燥器中冷卻30min后精密稱定質(zhì)量,按以下公式計(jì)算固形物去除率。
固形物去除率=(澄清前固形物質(zhì)量-澄清后固形物質(zhì)量)/澄清前固形物質(zhì)量×100%1.6.2毛蕊花糖苷(AS)和異毛蕊花糖苷(IAS)含量的保留率采用HPLC分別對(duì)澄清前后溶液中毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷的含量進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)以下公式計(jì)算毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷含量的保留率。(AS+IAS)保留率=澄清后溶液中(AS+IAS)的含量/澄清前溶液中(AS+IAS)的含量×100%1.6.3綜合評(píng)分(OverrallDesirability,OD)在用殼聚糖澄清劑對(duì)裸花紫珠水提取液進(jìn)行除雜處理時(shí),既需要最大限度地保留目標(biāo)有效成分,又需要保證較好的澄清效果,所以選取固形物去除率(Y1)和(AS+IAS)保留率(Y2)一同作為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分,將Y1的權(quán)重設(shè)為0.4,Y2的權(quán)重設(shè)為0.6,則OD=(Y1/Y1max×0.4+Y2/Y2max×0.6)×100%。
2結(jié)果
2.1殼聚糖澄清工藝參數(shù)考察
參考相關(guān)文獻(xiàn)[11-13],影響水提液澄清效果的因素主要有藥液濃度、澄清劑用量、澄清溫度、攪拌速度、溶液的pH、靜置時(shí)間、水浴保溫時(shí)間等,通過預(yù)試驗(yàn),本研究選取藥液濃度(A)、殼聚糖用量(B)、澄清溫度(C)、攪拌速度(D)4個(gè)因素進(jìn)行考察,每個(gè)因素考察3個(gè)水平,因素水平見表1�！�1】
按L9(34)正交表安排試驗(yàn),以固形物去除率和AS+IAS含量的保留率為考察指標(biāo),進(jìn)行綜合評(píng)分。對(duì)綜合評(píng)分值進(jìn)行直觀分析和方差分析,試驗(yàn)安排及結(jié)果見表2,方差分析結(jié)果見表3。【2】
2.2結(jié)果分析
根據(jù)殼聚糖澄清劑對(duì)裸花紫珠葉水提取液澄清工藝考察結(jié)果可知,以綜合評(píng)分值進(jìn)行直觀分析,各因素影響大小順序?yàn)锽>A>C>D,方差分析結(jié)果,因素B(殼聚糖用量)對(duì)結(jié)果具有顯著性差異,故最優(yōu)方案為A3B3C2D1,即藥液濃縮至含生藥質(zhì)量濃度1∶12(0.083g/mL),殼聚糖澄清劑加入量為藥液體積的12%,絮凝溫度70℃,攪拌速度為100r/min。
2.3工藝驗(yàn)證取裸花紫珠水提藥液3份,每份25mL,按優(yōu)選的澄清工藝進(jìn)行處理,結(jié)果固形物去除率分別為19.85%、20.62%、21.05%,平均去除率為20.51%,RSD為2.96%;毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷含量之和的保留率分別為89.35%、91.28%、90.10%,平均保留率為90.24%,RSD為1.08%,說明優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行。
3討論
吸附澄清法是在中藥提取液或提取濃縮液中加入一種絮凝劑,通過高分子的電中和、吸附架橋等作用,使體系中的懸浮物及膠體粒子除去,使體系的澄明度得以提高的一項(xiàng)高新技術(shù)。殼聚糖用于中藥水提液的澄清主要與其吸附性能和絮凝作用有關(guān),可除去藥液中的蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠等大分子物質(zhì)[14]。
在運(yùn)用吸附澄清技術(shù)除雜時(shí)必須考慮到有效成份的保留率。同時(shí),也要考察固形物的收率,即是否能夠有效地降低服用劑量,達(dá)到精制的目的,更重要的是保證成品制劑的有效性。因此,通常應(yīng)從有效成份保留率、固形物收率以及主要藥效學(xué)等多方面進(jìn)行指標(biāo)考察,篩選合理可行的除雜工藝,對(duì)中藥水提液進(jìn)行精制處理。
本研究采用殼聚糖對(duì)裸花紫珠水提取液進(jìn)行澄清處理,以固形物去除率和水提液中有效成分-毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷的含量的保留率為考察指標(biāo)并對(duì)其澄清工藝進(jìn)行優(yōu)化,得到殼聚糖澄清裸花紫珠水提液的較佳工藝。在此工藝條件下固形物平均去除率為20.51%,毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷含量的平均保留率為90.24%。研究結(jié)果表明,殼聚糖對(duì)裸花紫珠水提液有明顯的絮凝澄清作用,固形物去除率較高,藥液的澄清度高,而且有效成分毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷的損失率較低。應(yīng)用過程中不會(huì)帶入無機(jī)離子,具有加量少,操作簡單,安全無毒等優(yōu)點(diǎn),是一種適用于工業(yè)化生產(chǎn)的絮凝工藝。
該工藝克服了傳統(tǒng)醇沉法存在的缺點(diǎn),工藝簡單,成本低廉,為工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用提供了參考。
參考文獻(xiàn)
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